【摘 要】
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该文旨在阐明nNOS对局灶性脑缺血后神经元再生的影响及nNOS抑制剂7-NI促进神经元再生对缺血损伤后学习记忆功能的改善作用,并初步探索nNOS调控神经元再生的分子机制.实验中采
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该文旨在阐明nNOS对局灶性脑缺血后神经元再生的影响及nNOS抑制剂7-NI促进神经元再生对缺血损伤后学习记忆功能的改善作用,并初步探索nNOS调控神经元再生的分子机制.实验中采用颈内动脉线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型,并选用nNOS特异性抑制剂7-NI作为研究工具.缺血1.5hr,再灌24hr后,小鼠脑组织相对梗死体积达29.31﹪,于再灌时给小鼠腹腔注射7-NI(30mg·kg<-1>)可减轻动物的行为缺陷症状,并显著缩小梗死范围(4.15﹪).证实7-NI对脑缺血损伤具有显著的保护作用.采用免疫组化的方法考察nNOS对局灶性脑缺血再灌注后海马齿状回神经元再生的影响:使用BrdU单标记、BrdU/NeuN及BrdU/GFP双标记法分别考察神经细胞增殖、分化、成熟及迁移情况.为了初步考察新生神经元的功能,我们采用跳台实验观察7-NI对小鼠脑缺血后学习记忆功能的影响.该实验室同期的研究发现,对于iNOS基因缺陷动物,nNOS抑制剂对缺血后神经元再生的促进作用显著减弱,但iNOS的表达可激发神经元再生,因此推测nNOS对神经元再生的调控作用是iNOS表达依赖性的.我们采用RT-PCR法检测nNOS抑制剂7-NI对脑缺血后小鼠海马中iNOS基因表达的影响.综合上述各实验结果我们得出结论,nNOS抑制了正常及脑缺血小鼠海马齿状回神经元再生.nNOS特异性抑制剂7-NI可显著增加正常及脑缺血后海马齿状回的神经元再生,新生神经元最终迁移至颗粒细胞层内并很可能整合入受损的神经网络中,替代死亡神经元发挥功能.nNOS对神经元再生的抑制作用可能通过其抑制了iNOS基因的表达而实现的,尽管实验结果显示,7-NI抑制缺血小鼠海马iNOS基因的表达增加,但这可能是7-NI对脑缺血的保护作用掩盖了其对iNOS基因表达的影响.进一步的研究应能排除药物对脑缺血的保护作用,而直接考察其对缺血后iNOS基因表达的影响.
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