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第一部分CXCR4、β-catenin及EMT相关因子在口腔鳞癌中的表达及与临床病理的关系目的检测CXCR4、β-catenin及EMT相关因子在口腔鳞癌淋巴结转移组与非转移组中表达的差别,探讨它们与临床病理特征之间的关系及CXCR4与β-catenin及EMT相关因子表达的相关性。方法应用免疫组化SP法检测CXCR4、β-catenin及EMT相关因子在60例口腔鳞癌中的的表达,应用x2或Fish确切概率法分析各指标与口腔鳞癌患者临床病理之间关系,Spearman相关性分析CXCR4与β-catenin及EMT相关因子的相关性。结果1. CXCR4、N-cadherin、Twist、Snail在淋巴结转移组的表达高于非淋巴结转移组；而β-catenin、E-cadherin在淋巴结转组的表达低于非淋巴结转移组,且差异有统计学意义(P<0.05)。2. CXCR4及Twist在中、低分化中高表达,β-catenin的膜表达在T1期中高表达(P<0.05)。3. β-catenin的表达与CXCR4呈负相关,相关系数为-0.497；Twist、Snail、 N-cadherin的表达与CXCR4呈正相关,相关系数分别为0.256、0.300、0.333(P<0.05)。结论EMT在口腔鳞癌的淋巴转移过程中发挥重要作用,CXCL12/CXCR4生物学轴可能作用于EMT的某个环节,并调控其发生。第二部分CXCR4调控口腔鳞状细胞癌上皮间质转化影响肿瘤转移的体外实验研究目的利用RNAi技术沉默CXCR4在人舌癌细胞Tscca中的表达,观察干扰后Tscca细胞迁移侵袭能力、凋亡及经典Wnt通路主要蛋白表达情况的变化。方法1.质体转染法将CXCR4siRNA转染至Tscca细胞,用RT-PCR检测siRNA对CXCR4的抑制作用。2.应用划痕实验观察CXCR4基因沉默后Tscca细胞迁移能力的变化。3.应用Transwell侵袭小室法观察CXCR4基因沉默后Tscca细胞侵袭能力的变化。4.应用Annexin V检测CXCR4基因沉默后Tscca细胞凋亡情况。5. Western blot检测CXCR4基因沉默后Tscca细胞中经典Wnt信号通路中主要蛋白的表达情况。结果1. RT-PCR结果证明siRNA对CXCR4的表达有明显抑制作用(P<0.05)。2.划痕实验证明CXCR4基因沉默后Tscca细胞迁移能力明显下降。3. Transwell侵袭实验证明CXCR4基因沉默后Tscca细胞侵袭能力明显降低(P<0.001)。4. Annexin V检测发现转染CXCR4siRNA细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。5. Western blot发现转染CXCR4siRNA后细胞MMP-2、MMP-9和N-cadherin表达水平降低,而E-cadherin蛋白表达水平升高,(P<0.001)。结论1. CXCR4基因沉默能够抑制人舌鳞癌细胞Tscca的迁移侵袭能力,CXCR4在舌鳞癌转移中起重要作用。2. CXCR4基因沉默能够显著抑制经典Wnt通路中相关基因MMP-2、MMP-9和N-cadherin的表达,而显著提高E-cadherin的表达,CXCR4可通过调控经典Wnt通路参与舌鳞癌EMT的发生。第三部分CXCR4调控口腔鳞状细胞癌上皮间质转化影响肿瘤转移的体内实验研究目的探讨转染CXCR4siRNA的人舌鳞癌细胞Tscca对裸鼠种植性肿瘤生长抑制及经典Wnt通路相关因子表达情况的影响。方法1.建立裸鼠舌鳞癌皮下动物模型。2.瘤内注射lipofectamine2000和CXCR4siRNA混合物,动态观察肿瘤生长情况,检测经典Wnt通通路成员等蛋白水平的表达变化。结果1.成功建立裸鼠舌鳞癌皮下动物模型。2.和对照组相较,CXCR4siRNA治疗组肿瘤生长抑制,肿瘤体积差别显著；应用免疫组化法检测肿瘤标本发现,CXCR4表达水平敲除后,MMP-2、 MMP-9、N-cadherin蛋白表达水平降低,而E-cadherin蛋白表达水平升高。结论1.裸鼠皮下舌鳞癌模型应用lipofectamine2000介导CXCR4siRNA治疗,同样敲除CXCR4表达,抑制经典Wnt通路的活性,上调E-cadherin表达,与体外试验结果一致。2. CXCR4可成为抑制口腔鳞癌转移的有效靶点。