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目的(1)观察对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤中Bruton酪氨酸激酶(Btk)、p-Btk、NF-κB、NLRP3、IL-1β、TNF-α的动态变化,初步探讨Bruton酪氨酸激酶(Btk)在APAP诱导的急性肝损伤中的作用。(2)探讨Btk抑制剂(LFM-A13)对乙酰氨基酚(APAP)诱导的小鼠急性肝损伤的影响及可能机制。方法(1)随机将54只SPF级C57BL/6J雄性小鼠分为9组,分别为正常对照组、APAP0.5h组、APAP1h组、APAP3h组、APAP6h组、APAP12h组、APAP24h组、APAP36h组、APAP48h组,每组6只。禁食12h后,单次腹腔注射APAP(300mg/kg)0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、36h和48h后处死相应组别的小鼠。测定各组血清ALT、AST;观察各组肝脏病理变化;ELSIA测定各组肝组织匀浆中IL-1β和TNF-α;Western blot测定肝组织中Btk、p-Btk、NF-κB及NLRP3表达。(2)随机将32只SPF级C57BL/6J雄性小鼠分为4组,分别为正常对照组、模型组(APAP组)、LFM-A13低剂量组(LFM-A13(3mg/kg)+APAP)、LFM-A13高剂量组(LFM-A13(30mg/kg)+APAP),每组8只。禁食12h后,正常对照组小鼠腹腔注射0.9%生理盐水,模型组小鼠单次腹腔注射APAP(300mg/kg),LFM-A13低剂量组和高剂量组小鼠单次腹腔注射APAP前1h分别予以LFM-A13 3mg/kg和30mg/kg腹腔注射,腹腔注射APAP24h后处死各组小鼠,测定各组血清ALT、AST;观察各组肝脏病理变化,计算各组HAI评分;ELSIA测定各组肝组织匀浆中IL-1β和TNF-α;Western blot测定肝组织中Btk、p-Btk、NF-κB及NLRP3表达。结果(1)与正常对照组相比,APAP干预后的各组血清ALT(F=100.968,P=0.000)、AST(F=73.539,P=0.000)、肝脏坏死程度(F=29.845,P=0.000)、肝脏Btk(F=441.280,P=0.000)、p-Btk(F=1323.022,P=0.000)、NF-кB p65(F=133.125,P=0.000)及NLRP3水平(F=820.095,P=0.000)、IL-1β(F=8.643,P=0.000)、TNF-α(F=20.545,P=0.000)含量均有变化,其中24h的各种指标最高。(2)与正常对照组相比,APAP组血清ALT、AST明显增加(P<0.01);与APAP组相比,各LFM-A13干预组小鼠血清ALT、AST明显下降,且LFM-13低剂量组下降最明显,差异有统计学意义(P<0.01)。APAP组肝窦充血明显,可见大片坏死,主要表现为小叶中心性坏死;各LFM-A13干预组肝窦充血及坏死面积均明显减轻,APAP组HAI评分明显高于正常对照组(P<0.01),各LFM-A13干预组HAI评分较APAP组明显下降(P<0.01)。APAP组IL-1β、TNF-α明显高于正常对照组和LFM-A13干预组(P<0.01)。western blot提示APAP组p-Btk/Btk表达灰度比值、NF-кB p65、NLRP3高于正常对照组(P<0.01),各LFM-A13干预组相应指标明显低于APAP组(P<0.05)。结论(1)单次腹腔注射APAP诱导的小鼠肝损伤呈现动态变化;(2)APAP诱导的急性肝损伤存在Btk表达及其磷酸化增加、NLRP3炎性小体形成、NF-κB激活及IL-1β、TNF-α升高;(3)LFM-A13可以减轻APAP诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与抑制Btk表达及其磷酸化、降低NLRP3炎性小体形成、NF-κB激活及IL-1β、TNF-α升高有关。