PRDX-6蛋白对C57小鼠骨髓造血干细胞保护作用及分化作用的研究

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[目的]  通过研究PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤小鼠骨髓造血干细胞(HemopoieticStem Cell,HSC)的修复作用和PRDX-6蛋白对小鼠骨髓造血干细胞的促分化作用,为PRDX-6蛋白在临床上提高抗癌药物疗效,减少抗癌药物副作用的可行性,提供实验依据。  [方法]  取6~8周龄C-57小鼠股骨,胫骨骨髓,用梯度离心法分离后培养小鼠HSC。  1.PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤骨髓造血干细胞的修复作用:(1) PRDX-6蛋白对HSC的促增殖作用:①在显微镜下观察不同浓度PRDX-6蛋白对小鼠HSC形态的影响。②应用CCK-8法检测不同浓度PRDX-6蛋白对小鼠HSC增殖的作用。③应用流式细胞术检测PRDX-6蛋白对小鼠HSC细胞周期的影响。④应用流式细胞术检测PRDX-6蛋白对小鼠HSC的CD-117表达的影响。(2)阿糖胞苷对HSC的抑制作用:应用CCK-8法观察不同浓度阿糖胞苷对小鼠HSC的抑制作用。(3) PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤小鼠HSC修复作用:①在显微镜下观察不同给药方式PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤小鼠HSC的修复的细胞形态学影响。②应用CCK-8法检测不同给药方式PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤小鼠HSC的修复作用。③应用流式细胞术检测PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤小鼠HSC细胞周期的影响。④应用流式细胞术检测PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤小鼠HSC的CD-117表达的影响。  2.应用流式细胞术检测PRDX-6蛋白对小鼠HSC的促分化作用。  [结果]  1.PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤骨髓造血干细胞的修复作用:  (1)PRDX-6蛋白对HSC的促增殖作用:①在显微镜下观察发现随着PRDX-6蛋白浓度的增加,小鼠HSC生长逐渐旺盛,细胞数量增多。②应用CCK-8法检测表明:a.随着PRDX-6蛋白作用时间延长,HSC细胞的增殖率逐渐升高。b.随着PRDX-6蛋白浓度的增高,HSC细胞的增殖率逐渐升高。c时间和浓度共同作用下时间和浓度对HSC的增殖有交互作用。③应用流式细胞术检测表明实验组HSC的S期高于空白组,实验组HSC的G1期高于空白组。④应用流式细胞术检测表明实验组HSC的CD-117表达高于空白组。以上结果均说明PRDX-6蛋白对小鼠HSC有促增殖作用。(2)阿糖胞苷对HSC的抑制作用:应用CCK-8法检测表明:a.随着阿糖胞苷作用时间延长,HSC的增殖抑制率逐渐升高;b.随着阿糖胞苷浓度的增高,HSC细胞的增殖抑制率逐渐升高;c.时间和浓度共同作用下时间和浓度对HSC的增值有交互作用。(3) PRDX-6蛋白对阿糖胞苷损伤小鼠HSC的修复作用,结果如下:①在显微镜下发现同时给药组的HSC生长最旺盛,细胞数量最多。②应用CCK-8法检测表明同时给药组的增殖率最高。③应用流式细胞术检测表明实验组的S期最高,损伤修复组的S期高于损伤组。④应用流式细胞术检测表明实验组CD-117的表达最高,损伤修复组CD-117的表达高于损伤组。以上结果均说明PRDX-6蛋白对阿糖胞苷引起的小鼠HSC的损伤有修复作用。  2.应用流式细胞术检测PRDX-6蛋白对小鼠HSC的促分化作用。用单因素方差分析的统计学方法分析,结果表明,同时给药组CD-31的表达最高。因此,说明PRDX-6蛋白对小鼠HSC有促分化作用。  [结论]  1.PRDX-6蛋白对HSC有促进增殖作用;阿糖胞苷对HSC有抑制作用;PRDX-6蛋白对阿糖胞苷引起的HSC抑制有修复的作用。  2.PRDX-6蛋白可以促进HSC的分化。
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