癫痫脑损伤(epilepsy brain damage EBD)是指癫痫反复发作未得到有效控制或癫痫持续状态对脑组织造成的损伤。长期、持续的癫痫发作会对脑组织产生严重影响,是引起儿童智力障碍及精神行为异常的重要原因,严重影响患儿今后的生活质量。目前癫痫脑损伤的发病机制仍不十分清楚,因此,研究癫痫脑损伤的发病机制成为一个刻不容缓的问题。内质网是真核细胞中的细胞器,可调节Ca2+浓度及负责蛋白质转运,任何影响Ca2+浓度或者导致蛋白质错误折叠及转运的因素,都可引起内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS),从而引起一系列的细胞内信号转导及异常基因激活。已有实验研究证实,凋亡是癫痫脑损伤的主要病理表现形式,目前主要是由三条信号转导通路来调控细胞凋亡：线粒体通路、死亡受体通路、内质网应激通路。内质网应激作为一种新型的细胞凋亡通路,与癫痫脑损伤关系密切。故研究两者之间的关系,是近几年来研究的热点。促红细胞生成素是近几年来新发现的一种脑保护剂,它可通过抗凋亡、抗氧化等反应来减轻对细胞的损伤,但其在内质网应激通路中作用机制如何,尚无相关报道。故本实验就是采用促红细胞生成素进行干预,观察大鼠海马区CHOP和Caspase-12的表达变化,从而进一步揭示促红细胞生成素发挥脑保护作用的可能机制。目的本实验就是在建立氯化锂—匹罗卡品癫痫持续状态模型的基础上观察内质网应激相关因子CHOP和Caspase-12在癫痫脑损伤大鼠中的表达及促红细胞生成素通过内质网应激途径发挥脑保护作用的可能机制。材料与方法1实验动物分组120只21日-30日龄健康清洁级SD大鼠,雌雄不限,体重50g-100g,随机分为对照组,癫痫组及干预组,每组40只,各组再按照大鼠癫痫发作后6h,24h,48h,72h分为4个亚组,每亚组10只(n=10)。2模型建立与行为学观察模型建立参考文献,各组大鼠在给药后观察,连续发作达到IV或V且持续30min以上被认为是达到癫痫持续状态,大鼠癫性发作程度依据Racine6级(0—V)分级法。3标本的制备与采集各组大鼠分别于癫痫发生6h,24h,48h,72h后,给予10%水合氯醛3ml/Kg腹腔注射麻醉,开胸暴露心脏,剪开右心耳,接5号头皮针灌注0.9%生理盐水快速冲洗,4%多聚甲醛固定,直到肝脏发白,肢体变硬为止。开颅取脑后4%多聚甲醛固定24小时,做冠状切片,进行苏木素一伊红(HE)染色及免疫组化检测。4观察指标(1)常规HE染色,光镜下观察,大鼠海马脑组织区的病理学改变。(2)采用Biosen图像分析系统对各组切片进行分析,每张切片取5个视野(×400),在该系统中,测定CHOP、Caspase-12阳性产物的积分光密度值(IOD),IOD为所测范围内各像素光密度之和,IOD值为阳性产物面积与染色深度之积,IOD值越大表示阳性产物表达越强。5统计学分析采用SPSS17.0软件进行比较,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用最小显著差异LSD检验,数据用x±s表示,认为α<0.05有统计学意义。结果1各组大鼠海马区脑组织HE染色结果高倍光学显微镜下观察,正常对照组海马区细胞形态基本正常,排列整齐,胞核清楚,胞浆染色均匀,胞质丰富,胞膜完整,核仁明显。癫痫组大鼠海马区细胞排列紊乱,细胞形态不完整,部分肿胀、破裂,残留的神经元胞体皱缩,突起减少,核仁消失,胞浆疏松,细胞轮廓部分消失、部分界限不清,顺序排列紊乱,部分齿状回有增宽现象。干预组神经元损伤较癫痫组明显减轻,海马区神经元坏死变性较少,细胞结构较完整,排列相对整齐,海马区神经细胞存活数量较多,胞核清楚,多数细胞形态相对正常。2免疫组织化学结果癫痫组大鼠海马区CHOP的表达较同一时间点对照组比较表达明显增多(P<0.05),差异具有统计学意义；干预组大鼠海马区CHOP的表达较同一时间点癫痫组表达明显减少(P<0.05),差异具有统计学意义。癫痫组大鼠海马区Caspase-12的表达较同一时间点对照组的表达明显增多(P<0.05),差异具有统计学意义,且随着时间的延长,Caspase-12的表达依次增加,在48h达到峰值；干预组大鼠海马区Caspase-12的表达较同一时间点癫痫组表达明显减少(P<0.05),差异具有统计学意义。对照组各时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论1CHOP及Caspase-12在癫痫持续状态发生后表达明显增加,提示内质网应激机制参与了癫痫脑损伤的发生发展。2促红细胞生成素作为一种脑保护剂,可通过减少CHOP及Caspase-12的表达,通过降低内质网应激机制来发挥脑保护作用。