【摘 要】
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目的:检测一些铜基配合物对A549/DDP细胞的体内外抑制效果,初步探讨其诱导细胞凋亡及抗肿瘤血管生成作用的机制,为临床治疗耐顺铂非小细胞肺癌提供理论依据。方法:第一章:用MTT法测定了三种含席夫碱配体和1.10’-邻菲罗啉混配的铜基配合物对A549/DDP的细胞毒性;用流式细胞术检测了这些配合物体外诱导细胞凋亡的作用,并用活性氧和线粒体膜电位的变化探讨了体外诱导细胞凋亡的机理;采用WB实验技术,
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目的:检测一些铜基配合物对A549/DDP细胞的体内外抑制效果,初步探讨其诱导细胞凋亡及抗肿瘤血管生成作用的机制,为临床治疗耐顺铂非小细胞肺癌提供理论依据。方法:第一章:用MTT法测定了三种含席夫碱配体和1.10’-邻菲罗啉混配的铜基配合物对A549/DDP的细胞毒性;用流式细胞术检测了这些配合物体外诱导细胞凋亡的作用,并用活性氧和线粒体膜电位的变化探讨了体外诱导细胞凋亡的机理;采用WB实验技术,考察了这几个铜基配合物对VEGF/VEGFR2信号转导通路下游重要蛋白VEGFR2、Fak和Akt以及它们的磷酸化蛋白p-VEGFR2、p-Fak和p-Akt的表达,从分子水平上阐述了几个铜基配合物体外抑制抗A549/DDP的机理;采用皮下注射A549/DDP细胞,建立了A549/DDP肿瘤模型,通过腹腔注射铜基配合物进行治疗后,肿瘤生长的抑制效果被评价;采用HE染色观察肿瘤组织形态学变化,用免疫组化进行CD31染色分析肿瘤体内血管生成抑制效果,并考察了凋亡相关因子Bcl-2,Bax和Caspase-9的表达情况,阐述了铜基配合物体内抑制A549/DDP肿瘤生长的机理。第二章:用MTT法测定了另外三种含席夫碱配体的铜基配合物的肿瘤细胞毒性;用流式细胞术检测了其诱导A549/DDP细胞凋亡的作用,并探讨了其诱导细胞凋亡的机理;采用WB实验技术,考察了这几个铜基配合物对VEGF/VEGFR2信号转导通路下游重要因子VEGFR2、Fak、Akt和Erk以及它们的磷酸化蛋白的表达,验证了这几个铜基配合物的体外抗A549/DDP细胞的机理。第三章:用5-甲基-2-羟基-1,3-苯二甲醛、L-苯丙氨醇、氢氧化钠以及硝酸铜为原料,以乙醇为溶剂,制备铜基配合物,并用红外光谱、X-射线晶体衍射、X-射线粉末衍射表征其晶体结构;MTT法检测该化合物的细胞毒性作用,流式细胞术验证其诱导A549/DDP细胞凋亡作用及机理,WB证实其对肿瘤血管生成相关通路因子表达的抑制作用。结果:第一章:体外实验证实,三种铜基配合物均有抑制A549/DDP细胞生长,降低线粒体膜电位,诱导细胞凋亡,调节胞内活性氧水平,下调VEGF/VEGFR2信号通路下游重要因子的作用;体内实验显示,三种铜基配合物均能够显著抑制A549/DDP细胞肿瘤模型生长,上调Bax和Caspase-9的表达,下调Bcl-2的表达,发挥促凋亡作用,减少肿瘤内血管内皮细胞数目,抑制肿瘤血管生成。第二章:三种铜基配合物均抑制A549/DDP和C33A细胞生长,均下降A549/DDP细胞线粒体膜电位诱导凋亡,均不同程度地调节VEGF/VEGFR2信号通路中的重要分子VEGFR2、Fak、Akt、Erk及其磷酸化蛋白的表达。第三章:合成并表征了一个新型席夫碱铜基配合物,该铜基配合物对多种肿瘤细胞均有毒性作用,且显著下降A549/DDP细胞的线粒体膜电位,诱导肿瘤细胞凋亡;下调VEGF/VEGFR2信号通路中的重要蛋白的表达。结论:体内外实验均证实,多个铜基配合物均对A549/DDP细胞有一定的抑制作用,其降低线粒体膜电位、诱导凋亡,并调节VEGF/VEGFR2信号通路中重要蛋白因子的表达。这些抑制作用与浓度和时间相关,但作用效果因其结构差异而呈现不同水平。体内实验表明,部分铜基配合物通过干扰Bax/Bcl-2/Caspase-9信号轴诱导肿瘤细胞凋亡,并减低血管内皮细胞数目从而抑制肿瘤血管生成。这些铜基配合物对耐顺铂非小细胞肺癌有潜在的治疗效果,有希望成为治疗耐顺铂NSCLC治疗的候选药。
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