【摘 要】
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目的:研究CCL5在头颈鳞状细胞癌中表达,通过siRNA转染人喉鳞状细胞癌Hep-2、TU177,探索siRNA干扰喉鳞状细胞癌后对其增殖、迁移、周期、凋亡、耐药相关生物学特性的研究,从而为将来CCL5在喉鳞状细胞癌中的靶向治疗提供理论基础。方法:TCGA数据库挖掘并分析CCL5在头颈鳞状细胞癌患者中表达情况,细胞培养喉鳞状细胞系（TU177、Hep-2）,RT-PCR检测在不同细胞系的CCL5敲
【基金项目】
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项目名称:肿瘤细胞异质性在喉鳞状细胞癌不同肿瘤细胞亚群特征性影响研究（编号:2018044）,项目来源:2018年山西省卫生和计划生育委员会科研课题,起止年月:2019年1月-2022年12月,研究经费2（万）； 项目名称:CCL5对喉癌进展及顺铂耐药影响研究（编号:2020SY263）,项目来源:2020年山西省研究生教育创新项目,起止年月:2020年7月-
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目的:研究CCL5在头颈鳞状细胞癌中表达,通过siRNA转染人喉鳞状细胞癌Hep-2、TU177,探索siRNA干扰喉鳞状细胞癌后对其增殖、迁移、周期、凋亡、耐药相关生物学特性的研究,从而为将来CCL5在喉鳞状细胞癌中的靶向治疗提供理论基础。方法:TCGA数据库挖掘并分析CCL5在头颈鳞状细胞癌患者中表达情况,细胞培养喉鳞状细胞系（TU177、Hep-2）,RT-PCR检测在不同细胞系的CCL5敲降效率,分别在不同的细胞系筛选敲降效率最高的siRNA进行后续实验。每个细胞系通过转染siRNA、NC两组,CCK8法检测各组细胞系的增殖情况,细胞划痕法检测各组的迁移情况,流式细胞法检测各组细胞的细胞周期及凋亡情况,RT-PCR、western blot检测耐药相关基因Bax、MRP2的mRNA、蛋白水平。实验结果采用SPSS 25.0软件进行分析,结果图由Graphpad Prism 8.0完成,细胞划痕、western blot实验由Image J软件进行分析。实验结果满足正态分布均采用两独立样本t检验评估两组间差异,单因素方差分析多组样本间统计学差异,若有统计学意义,采用LSD-t进行组间两两比较。计量资料用?x±s表示,如果实验结果不满足正态分布,则采用秩和检验,若多组间秩和检验有统计学意义,则进行组间两两比较。P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.通过检测TCGA数据库发现CCL5在头颈鳞状细胞癌中表达明显高于头颈正常组织（P<0.001）。2.将三条siRNA均转染到喉癌鳞状细胞TU177、Hep-2中,利用RT-PCR检测其敲降效率发现:在TU177细胞系中si-1敲降效率最好,在Hep-2细胞系中si-2、si-3均有较高的敲降效率,由于si-2的敲降效率更高,因此选择si-2进行Hep-2细胞系后续实验。在TU177细胞系中分为si-1组、NC组,在Hep-2细胞系中分为si-2组与NC组,两细胞系分别对其增殖、迁移、周期、凋亡、耐药相关基因检测。结果显示:TU177细胞系中si-1组在24h、48h、72h、96h增殖率明显低于NC组（P<0.01）,si-1组在24h迁移率明显低于NC组（P<0.05）。si-1组的晚期凋亡率大于NC组晚期凋亡率（P<0.05）,si-1组Bax的相对表达量高于NC组（P<0.05）,说明在TU177细胞系中抑制CCL5的表达可抑制喉鳞状细胞癌的增殖、迁移,主要促进其晚期凋亡,提高顺铂敏感性。Hep-2细胞系中si-2组在24h、48h、72h、96h增殖率明显低于NC组（P<0.01）,si-2组在24h、48h迁移率均明显低于NC组（P<0.05）。si-2组的早期凋亡率和晚期凋亡率大于NC组（P<0.001）,si-2组MRP2的相对表达量低于NC组（P<0.05）,蛋白水平si-2组Bax的相对表达量高于NC组（P<0.001）。说明在Hep-2细胞系中抑制CCL5的表达可抑制喉鳞状细胞癌的增殖、迁移,促进其凋亡,增强顺铂敏感性,降低顺铂耐药性。然而,在Hep-2细胞系中统计学方法发现CCL5通过G2/M期抑制细胞周期（P<0.01）,但由于其抑制效果不明显,未能达到临床意义。结论:CCL5在头颈鳞状细胞癌中高表达,通过siRNA干扰CCL5抑制喉癌细胞增殖、迁移、顺铂耐药,促进凋亡、顺铂敏感性。
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