2016年3月和12月,2017年7月本人先后3次去新疆维吾尔自治区,分别对3个存栏2000头的奶牛场进行结核病检疫,发现3个场均为阳性场。这三个牛场曾对检疫阳性牛全部淘汰扑杀,但一直又有新的阳性牛检出,而且大部分是青年牛,由于3个奶牛场均是自繁自养模式,期间未有牛的引进,由此推断本场还存在传染源并导致新生牛的传染,因此,本课题围绕3个奶牛场结核检疫阳性牛病变观察、传染源查找、传播途径追踪及感染致病机制探索等开展研究工作。本研究旨在通过剖检观察检疫阳性牛的眼观病变及组织病理学变化,揭示检疫阳性牛的结核病变特征;采集宰杀阳性牛病料分离结核菌株并通过动物感染试验研究其致病特点及其传播途径;运用本实验室建立的结核杆菌复合群和牛分枝杆菌绝对荧光定量PCR方法,检测收集奶样和粪便,旨在探究奶牛场可能存在的传染源。剖检观察发现:在扑杀的65头阳性牛中,有37头奶牛的肠系膜淋巴结存在结核病变,22头检出肺门淋巴结结核病变,12头肝脏存在结核病变,而仅有8头存在肺脏结核病变,从而揭示了检疫奶牛场结核病变的分布特点;利用本实验室建立的快速、准确检测结核杆菌复合群和牛分枝杆菌的绝对荧光定量PCR方法从阴性牛的奶样和粪便、混合奶样和牛场粪便中均检出了结核菌,这进一步证实奶牛场存在可疑的传染源;通过对分离的38株菌进行鉴定表明,引起牛结核病的病原菌主要为牛分枝杆菌,但有3株结核分枝杆菌,该菌的存在会对牛场人员及食品安全带来重大隐患。观察感染兔的症状表现、剖检病变及组织病理学变化,细菌抗酸染色观察和定量检测,结果表明:腹腔注射组、口服组的试验兔无呼吸道等症状,滴鼻组表现呼吸道症状,并且所有组的试验兔均见消瘦,体重下降。腹腔注射和口服感染组试验兔的病变主要存在于肠系膜淋巴结、肺门淋巴结,其次是肝脏和脾脏,而肺的病变极为少见,这与扑杀阳性牛的病变分布特点相似。而通过滴鼻方式感染的试验兔,病变主要在肺脏,但病变检出率较低,这与检疫阳性牛的病变分布明显不同。这进一步验证了检疫牛场结核阳性牛主要是通过消化道感染的推测。此外,与滴鼻的方式相比,通过腹腔注射和口服感染的试验兔病变程度更为严重。本研究发现:3个奶牛场结核检疫阳性牛主要是青年后备牛,其病变主要在肺外组织,尤其是肠系膜淋巴结;对分离的38株菌进行鉴定,引起牛结核病的病原菌主要为牛分枝杆菌,但也存在少量结核分枝杆菌。通过动物试验表明:检疫牛场结核的发生主要与牛分枝杆菌经消化道途径感染有关,该研究为牛结核病的检疫净化提供了新的理论依据;从检疫阳性牛场采集的阴性牛的奶样和粪便以及混合奶样和粪便中均检到了结核菌,这可以揭示检疫净化牛群不断有新阳性牛出现的原因。