Ml和M2型肿瘤相关巨噬细胞对胆囊癌细胞增殖、凋亡和VEGF-C蛋白表达的影响

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目的:探讨体外诱导的Ml型和M2型巨噬细胞对胆囊癌细胞GBC-NOZ的增殖、凋亡和VEGF-C蛋白表达的影响。方法:用佛波酯(PMA)诱导人单核细胞系(THP-1)成巨噬细胞,再利用干扰素-γ(IFN-γ)、脂多糖(LPS)和白介素-4(IL-4)分别诱导成Ml型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,并分别应用单克隆抗体CD80和CD163进行流式细胞表型鉴定。通过体外建立transwell共培养体系将巨噬细胞、单核细胞THP-1和胆囊癌细胞GBC-NOZ共培养,分为M1组、M2组、THP-1组、空白对照组。通过CCK-8法检测四组GBC-NOZ细胞增殖能力并建立生长曲线, AnnexinV/PI双染凋亡法检测四组GBC-NOZ细胞凋亡情况,蛋白质印迹法(WesternBloting)检测胆囊癌细胞GBC-NOZ VEGF-C蛋白水平的变化。结果:单核细胞系(THP-1)经IFN-γ和LPS诱导后,转化为表达CD80(阳性率达68.83±2.77%,p<0.01)的M1型巨噬细胞,经IL-4诱导后,转化为表达CD163(阳性率达73.88±3.95%,p<0.01)的M2型巨噬细胞。M2组GBC-NOZ细胞增殖速度比M1组、THP-1组、空白对照组快,差异均有显著性(p<0.01)。M1组GBC-NOZ细胞增殖速度比THP-1组和空白对照组慢,差异均有显著性(p<0.01)。M1组的GBC-NOZ细胞凋亡率较M2组、THP-1组和空白对照组均显增高(P<0.01),而M2组、THP-1组与空白对照组之间细胞凋亡率无显著性差别(P>0.01)。同空白对照组和THP-1组比较,M1组VEGF-C蛋白表达明显减少(P<0.05);且M1组中VEGF-C蛋白表达随着时间增加而减少。M2组的VEGF-C蛋白表达均高于相应时间点的空白对照组和THP-1组(P<0.05);M2组中VEGF-C蛋白表达随着时间增加而增加。结论:(1) Ml型巨噬细胞促进GBC-NOZ细胞凋亡,抑制其生长,抑制其VEGF-C蛋白的表达。(2)M2型巨噬细胞对GBC-NOZ细胞凋亡无影响,促进GBC-NOZ细胞生长并上调其VEGF-C蛋白的表达。
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