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癌症是严重危害人类生命与健康的常见多发病。世界卫生组织专家预测，癌症将成为新世纪人类的第一杀手，并成为全球最大的公共卫生问题之一。放射治疗，连同手术和化疗，为治疗恶性肿瘤的三大常规手段，在肿瘤治疗中有着非常重要的地位。但是，放射线在治疗肿瘤的同时也对正常组织造成损伤，甚至造成严重的毒副作用，临床上常因正常组织耐受剂量的限制而不能给予肿瘤足够的照射剂量，造成治疗失败。因此，如何在提高肿瘤治疗剂量的同时减少其周围正常组织的照射，成为放射肿瘤学的一个永恒的追求。围绕这个目标，近年来在放射治疗领域涌现出许多新方法，比如调强放疗、立体定向放射治疗，三维适形放疗，快中子治疗，质子治疗和硼中子俘获治疗等。 硼中子俘获治疗（Boron neutron capture therapy, BNCT）对正常组织的毒副作用较低，肿瘤可以得到合适的照射剂量，从而提高肿瘤局控率、患者的生存率及生存质量。此外，由于毒副作用相对较低，现行的BNCT治疗方案多为单次照射，患者只需在医院观察1-2天就可以出院。毫无疑问，这也是BNCT的一大优点。BNCT的临床应用已取得令人鼓舞的结果。 成功应用BNCT治疗肿瘤的核心问题是如何使得含10B的俘获剂选择性地在肿瘤组织内积聚，而且其浓度大大高于周围正常组织。解决这一问题需要不断开 浙江大学博士学位研究生毕业论文发更理想的俘获剂和改进给药途径。 单克隆抗体导向治疗是肿瘤生物治疗的重要内容之一，近年来发展很快，己经有单抗药物获得FDA批准进入临床。 HER－2在肿瘤的发生发展中起重要作用，其过表达与肿瘤复发、转移、耐药等恶性行为相关，这类病人往往预后差。大约 3 0％的乳腺癌和卵巢癌患者 HER－2高表达，HER－2高表达在许多其他肿瘤也普遍存在。此外，HER－2在转移灶中的表达与原发灶相似，或高于原发灶。更为有利的是，在正常的成人组织，只有某些类型的上皮细胞有低水平的HER－2表达，在大多数正常组织中HER－2表达阴性。因此，HER－2是理想的肿瘤靶向治疗的“分子靶”。随着单抗研究的不断深入，有许多针对HER－2 的单抗问世，其中人源化单抗，Trastuzumab (HercePtin人 免疫原性低，能与HER上的细胞外结构域特异性结合，己经获得FDA批准进入临床。Trastuzumab（Herceptin）是第一个，也是目前唯—一个，获FDA批准应用于实体瘤的靶向癌基因的药物。 BNCT所需要的硼含量大，如果将单克隆抗体直接与’勺耦合，每个单克隆抗体需连接 1000个以上的’怕，而抗体连接如此大量的‘怕后难于保持其靶向性和亲和力。 脂质体具备运载能力强、生物相容性好，而且大小及膜特性容易控制，是很好的药物运载工具。水溶性硼酸叮陡（Waer Soluble boronated Acridine，WSA）是我们的合作者研制和开发的一个新的化合物，包含10个硼原子，l 个叮陡类似物和 1 个精咪分于。WSA含硼原于丰富，有DNA结合特性，精咪的存在增加了其水溶性，是个很有前途的BNCT新药。而且，可以采用pH梯度法将WSA主动装入脂质体内，每个脂质体的硼含量达到 10’水平。 将肿瘤生物治疗手段引入肿瘤放疗领域，把单克隆抗体导向治疗的优势和脂质体运载大量药物的能力结合起来，将可能为BNCT提供新的技术支持，赋予这一新的肿瘤治疗手段更大的威力。目前尚未见有以Trastuzumab（Herceptin）为抗体构建免疫脂质体的尝试。我们认为，采用临床可得的抗体构建免疫脂质体有更为现实的意义。因此，我们有兴趣将Dmstsab作为抗体构建肿瘤靶向免疫脂质体，应用于硼中子俘获治疗研究。 2 浙江大学博士学位研究生毕业论文 研究目的 本课题将首先采用微团转移法将单克隆抗体Trastuzumab连接到装载WSA 的脂质体构建肿瘤靶向免疫脂质体，逐步优化构建条件，检测脂质体的稳定性和 靶向特异性；然后观察该脂质体在动物体内的生理分布；SK－BR－3细胞对该脂质 体－＊SA的摄取、滞留和内化特征；激光共聚焦显微镜下＊SA的亚细胞分布： 中子激发摄取WSA的细胞，观察细胞的生长抑制情况。 第一部分 TrastuzumabWSA免疫脂质体的构建 采用成膜－水化结合冷冻－熔融法制备脂质体。先将含氖－胆固醇十六皖基乙醚 的脂质原料（DSPC：CHO：DSPE．PEG—57：40：3 mol％）干燥成薄膜，然后 加入柠檬酸盐缓冲液…H 4．0人 水化、冻溶后形成水核 pH值为 4刀的脂质体。 反复推注经过双层 100 urn聚碳酸酯膜，使脂质体大小一致。pH梯度法将水溶性 硼酸叮促（WSA）装载到脂质体内。低温透射电镜观察显示，脂?