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目的:通过检测糖原合成激酶-3 β(GSK3 β)过表达的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表型的异常,探讨GSK3 β活性异常对CHO甾体激素合成的影响。然后对GSK3 β过表达的CHO细胞给予小檗碱进行干预,并检测干预后其激素的变化。通过该实验试证明GSK3 β表达量的改变可能同时调节PCOS糖代谢和甾体激素合成,而小檗碱可能通过对GSK3 β的调节,达到对CHO细胞甾体激素的分泌的调控,为临床应用小檗碱治疗PCOS提供基础理论依据。方法:本实验应用RT-PCR的方法扩增人GSK3 β基因,构建 GSK3 β基因真核表达载体pEGFβ-N1-Gsk3 β,将CHO细胞进行传代培养,使用脂质体转染技术使GSK3 β基因在CHO细胞中瞬时高效表达。观察GSK3 β转染前后CHO细胞的生长状态,采用免疫蛋白印迹(Western blot)技术评估细胞中GSK3 β的表达变化,并利用放射免疫法检测细胞培养液中雌二醇(E2)、孕酮(P)、雄激素(T)的水平,然后用小檗碱干预GSK3 β过表达的CHO细胞,再次检测细胞培养液中的三种激素的水平,用Rt-PCR技术检测在GSK3β转染前后CH0细胞中基因CYP11、CYP17、STAR的mRNA表达水平变化。结果:1.将重组质粒pEGFP-N1-Gsk3 β,紫外分光光度计定量、记录质粒浓度。参照Omega公司的LipofectamineTM 2000说明书进行转染。24h后观察pEGFP-N1-Gsk3 β瞬时转染后CHO细胞增殖力下降,并通过Western Blot检测细胞中GSK3 β蛋白的表达水平,发现与空质粒转染组相比,GSK3β转染后细胞中的GSK3 β蛋白的表达水平是升高的。2.通过对各组培养液中甾体激素水平进行统计学分析发现,pEGFP-N1-Gsk3 β与EGFP-N1比较:培养液中T、P、E2的数值均是降低的,但是这些变化不具有统计学意义,经过PMSG刺激后,仍不具有统计学意义;pEGFP-N1-Gsk3β+Ber 与 pEGFP-N1-Gsk3 β 相比,培养液中 T 值基本没有变化,P和E2均有所升高,但同样不具有统计学意义。3.RT-PCR测定细胞中甾体激素合成相关基因STAR、CYP11、CYP17的mRNA表达水平变化,发现与空质粒转染组相比,Gsk3 β过表达组STAR基因的表达量明显升高,而经过小檗碱处理后STAR表达量又有显著降低;CYP11和CYP17的表达量在各组之间都没有明显的差异性变化。结论:1.GSK3β的过表达引起了 STAR基因mRNA的升高,说明GSK3 β能够影响甾体激素合成酶的表达。2.与GSK3 β过表达组相比,小檗碱处理后STAR基因mRNA的表达量明显降低,中药小檗碱对GSK3 β过表达的CHO细胞甾体激素合成酶的表达具有调节作用。3.基因GSK3 β可能与PCOS的发病机制相关,并且可能是小檗碱发挥治疗作用的潜在靶点。