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背景与目的: 快速增殖的肿瘤细胞为获得更多的能量和大分子合成底物,其谷氨酰胺代谢途径发生改变,其中最重要的是谷氨酰胺酶活性升高。谷氨酰胺酶显著促进肿瘤细胞的增殖和癌变。研究表明,谷氨酰胺代谢与EGFR蛋白表达关系紧密,EGFR是谷氨酰胺酶潜在的下游基因。而转录因子c-Myc和E2F1可能调节EGFR表达。因此本课题假设谷氨酰胺酶通过转录因子c-Myc和E2F1调节EGFR的表达,进而促进肿瘤细胞增殖和癌变,最终我们将确认肿瘤细胞中谷氨酰胺酶调节增殖和癌变的信号通路。 方法: 首先我们利用谷氨酰胺饥饿试验,饱和密度实验,贴壁不依赖实验研究谷氨酰胺,谷氨酰胺酶对于肿瘤细胞增殖癌变的影响。我们将用人表达谱芯片实验寻找谷氨酰胺酶调节的下游基因。然后验证了谷氨酰胺酶是否能调节EGFR,c-Myc,E2F1蛋白表达水平。通过免疫共沉淀实验验证谷氨酰胺酶能否与c-Myc,E2F1结合。最后利用免疫荧光实验对谷氨酰胺酶和c-Myc蛋白进行细胞定位。 结果: 实验结果表明,谷氨酰胺,谷氨酰胺酶均能促进肿瘤细胞增殖癌变。抑制谷氨酰胺酶能下调EGFR,c-Myc,E2F1蛋白表达水平。谷氨酰胺酶蛋白能与c-Myc,E2F1蛋白结合,且谷氨酰胺酶与c-Myc在细胞核中发生共定位。 结论: 谷氨酰胺酶能通过与转录因子c-Myc,E2F1结合,且与c-Myc细胞核中发生共定位,上调c-Myc,E2F1蛋白水平,进而调节EGFR蛋白表达,促进肿瘤细胞增殖癌变。