【摘 要】
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目的:1.明确机械应力下细胞外金属基质蛋白酶(EMMPRIN)在人牙周膜细胞(HPDLCs)中的表达情况。2.研究机械应力下EMMPRIN及血管内皮生长因子(VEGF)在HPDLCs中的可能联系。3.探
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目的:1.明确机械应力下细胞外金属基质蛋白酶(EMMPRIN)在人牙周膜细胞(HPDLCs)中的表达情况。2.研究机械应力下EMMPRIN及血管内皮生长因子(VEGF)在HPDLCs中的可能联系。3.探索EMMPRIN与成骨基因的关系及其在牙周改建中对成骨基因的可能作用。材料和方法:1.从健康牙的牙周膜中培养原代HPDLCs,使用荧光免疫组织化学定位EMMPRIN及VEGF蛋白在HPDLCs中的表达位置;对HPDLCs施加6%,12%及20%强度的循环牵张力(strain treated,ST)和0.6磅(lbs)压缩力0.5—72h,检测EMMPRIN及VEGF的表达;添加外源性EMMPRIN蛋白(rh EMMPRIN treated,ET)检测VEGF基因和蛋白的表达状况。采用real-time PCR,Western Blotting,ELISA,CBA等方法分别检测HPDLCs中EMMPRIN及VEGF的转录水平,蛋白翻译水平以及分泌型的表达状况。2.使用基因芯片筛选与EMMPRIN相关的成骨基因,使用real-time PCR进一步研究在牵张力作用下相关基因的表达变化。结果:1.6%,12%及20%循环牵张力下EMMPRIN m RNA的表达趋势基本一致,EMMPRIN m RNA呈折线型特异性上调,48h时最显著;12%牵张力下HPDLCs中EMMPRIN细胞内蛋白及外分泌型蛋白在72h时上调最显著。压缩力对HPDLCs中EMMPRIN表达未及特异性调节作用。2.12%牵张力下VEGF m RNA呈折线型特异性上调;添加外源性EMMMPRIN蛋白后,VEGF m RNA、细胞内及外分泌型蛋白的表达均上调。牵张力进一步增强EMMPRIN蛋白对VEGF的上调作用。3.外源性EMMPRIN可以上调HPDLCs中ALP、PDGFA,下调NOG、BGLAP的表达。提示EMMPRIN可能参与应力介导作用下HPDLCs的分化及可能的成骨过程。结论:1.循环牵张力可以上调HPDLCs中EMMPRIN的表达。2.EMMPRIN可以通过调控VEGF的表达参与应力作用下牙周组织内的血管改建以及可能的骨改建。
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