【摘 要】
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目的:以骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）为研究目标,分析小鼠支气管哮喘模型中白介素-25（Interleukin-25,IL-25）、白介素-33（Interleukin-33,IL-33）、胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP）分别对OPN的影响,评估OPN与IL-25、IL-33、TSLP在气道重塑中的作用与关联。方法:1、将小鼠
【基金项目】
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国自然地区基金（基金课题81860008）; 贵州省科技厅（基金课题ZK[2021]一般344）
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目的:以骨桥蛋白（Osteopontin,OPN）为研究目标,分析小鼠支气管哮喘模型中白介素-25（Interleukin-25,IL-25）、白介素-33（Interleukin-33,IL-33）、胸腺基质淋巴细胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin,TSLP）分别对OPN的影响,评估OPN与IL-25、IL-33、TSLP在气道重塑中的作用与关联。方法:1、将小鼠随机分5组,分为正常组、哮喘模型组、抗IL-25中和抗体组、抗IL-33中和抗体组、抗TSLP中和抗体组。在OVA腹腔注射及雾化激发构建经典小鼠哮喘模型后,通过免疫组化、Western Blot及RT-PCR检测小鼠肺组织OPN与IL-25、IL-33、TSLP的表达,ELISA检测小鼠BALF及血清中的OPN与IL-25、IL-33、TSLP的表达情况;2、实验组小鼠分别通过抗IL-25中和抗体、抗IL-33中和抗体、抗TSLP中和抗体作用后,通过小鼠支气管HE染色、PAS染色分析气道炎症及气道重塑情况;RT-PCR、Western Blot、免疫组化观察小鼠肺组织中OPN的表达情况;ELISA检测小鼠血清、BALF中OPN的表达情况,综合评估哮喘小鼠经抗IL-25、IL-33、TSLP中和抗体干预后对OPN的影响和气道重塑的情况。结果:1、ELISA结果表明,哮喘模型组小鼠与正常组小鼠相比,血清及BALF中OPN的表达量明显升高（P＜0.05）;抗IL-25、IL-33、TSLP中和抗体组小鼠分别与哮喘模型组小鼠相比,血清及BALF中OPN的表达量明显下降（P＜0.05）。2、Western blot及免疫组化结果表明,哮喘模型组小鼠与正常组小鼠相比,肺组织中OPN的蛋白表达量明显升高（P＜0.05）;抗IL-25、IL-33、TSLP中和抗体组小鼠分别与哮喘模型组小鼠相比,肺组织中OPN的蛋白表达量明显下降（P＜0.05）。3、RT-PCR结果表明,哮喘模型组小鼠与正常组小鼠相比,肺组织中OPN的基因表达值明显升高（P＜0.05）,抗IL-25、IL-33、TSLP中和抗体组小鼠分别与哮喘模型组小鼠相比,肺组织中OPN的基因表达值明显下降（P＜0.05）。4、HE及PAS染色结果表明,哮喘模型组小鼠与正常组小鼠相比,支气管壁炎症细胞明显增多（细胞核大,深染,细胞体积大,不规则）,气管壁增厚,杯状细胞明显增生;经抗IL-25、IL-33、TSLP中和抗体干预后的哮喘小鼠分别与哮喘模型组小鼠相比,支气管壁炎症细胞明显减少,气管壁较薄,杯状细胞增生不明显。5、BALF计数分类结果表明,哮喘模型组小鼠的肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞计数及百分比均较正常组小鼠明显升高（P＜0.05）,抗IL-25、IL-33、TSLP中和抗体组小鼠分别与哮喘模型组小鼠相比,嗜酸性粒细胞计数及百分比均明显降低（P＜0.05）,在哮喘模型组小鼠中,肺泡灌洗液细胞分类计数百分比以嗜酸性粒细胞为主。结论:1、在支气管哮喘小鼠中,血清、BALF及肺组织中的OPN、IL-25、IL-33、TSLP表达量升高;2、分别经抗IL-25中和抗体、抗IL-33中和抗体、抗TSLP中和抗体干预后,血清、BALF及肺组织中OPN的表达下降,同时支气管哮喘的气道重塑得到改善;3、在支气管哮喘小鼠气道重塑中,OPN与IL-25、IL-33、TSLP可能存在一定的关联。
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