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背景:随着社会发展以及肥胖人口的增多,非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic Fatty Liver Disease,NAFLD)已成为当今世界最重要的肝脏疾病之一。迄今为止,尚无针对NAFLD的治疗药物在临床应用。最新证据表明,天然免疫系统,特别是单核-巨噬细胞介导的炎症反应,在NAFLD的发生发展中发挥关键作用。金丝桃苷(Hyperoside)是一种主要存在于药用植物中的类黄酮化合物,具有抗炎、抗氧化等许多生物学作用。相关研究证实,Hyperoside可抑制巨噬细胞中炎性细胞因子的产生。但Hyperoside在巨噬细胞中的作用机制及对NAFLD发生发展的影响,目前仍不明确。目的:本研究拟利用高脂饮食(high-fat diet,HFD)构建小鼠NAFLD模型,研究Hyperoside对NAFLD发生发展及病理改变的影响,证实Hyperoside对巨噬细胞介导的炎症的调控作用并探索Hyperoside调控巨噬细胞功能的分子机制,为临床干预NAFLD寻找新的思路。方法:1.利用野生型C57BL/6小鼠构建高脂饮食诱导的NAFLD模型,组织切片HE、油红O、天狼猩红染色观察肝脏脂肪变性、纤维化情况,葡萄糖耐受试验(glucose tolerance analysis,GTT)、胰岛素耐受试验(insulin tolerance analysis,ITT)评估糖耐量及胰岛素敏感性;2.免疫组织化学染色法检测NAFLD小鼠肝脏及附睾脂肪组织中巨噬细胞浸润情况,实时定量PCR(quantitative polymerase chain reaction,q PCR)分析肝脏组织中炎性细胞因子的表达水平,流式细胞技术分析外周血单核巨噬细胞亚群分化情况;3.体外培养小鼠骨髓来源的巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs),q PCR评估Hyperoside对巨噬细胞亚群标志物表达的影响,明确其对巨噬细胞极化的作用,q PCR及免疫印迹法检测BMDMs和外周血单核巨噬细胞内Nr4A1表达水平;4.根据上述实验结果,利用Nr4A1基因敲除小鼠验证Hyperoside对NAFLD发挥作用的靶点,明确Hyperoside对巨噬细胞极化的调节是否依赖于Nr4A1。结果:1.Hyperoside可减轻高脂饮食诱导的野生型小鼠的肝脏脂肪变性和纤维化;2.Hyperoside可改善高脂饮食诱导的野生型小鼠的全身胰岛素抵抗;3.Hyperoside可阻断高脂饮食诱导的野生型小鼠巨噬细胞相关的炎症反应并调控巨噬细胞亚群分化;4.Hyperoside可上调巨噬细胞中Nr4A1的表达,并依赖于Nr4A1来调节巨噬细胞的极化;5.Nr4A1敲除后Hyperoside对小鼠肝脂肪变性、纤维化和胰岛素抵抗的保护作用消除;结论:本课题证明,Hyperoside通过调控Nr4A1表达影响巨噬细胞极化,从而对高脂饮食诱导的NAFLD产生保护作用。实验结果显示,应用Hyperoside后,野生型小鼠肝脏脂肪变性、肝脏纤维化、胰岛素抵抗和炎症反应明显改善;并且,Hyperoside促进了巨噬细胞由促炎性的M1型向抑炎的M2型转化。另外,我们发现,Hyperoside干预的野生型小鼠外周血单核细胞以及体外培养的骨髓原代巨噬细胞中Nr4A1显著上调,而Nr4A1缺失后,Hyperoside对高脂饮食诱导的NAFLD及巨噬细胞亚群分化的调控作用消失。因此,我们得出结论,Hyperoside可通过调控巨噬细胞分化减轻NAFLD的发生发展,是有效防治NAFLD的潜在途径。