抗猪脂肪细胞膜蛋白血清的制备及性能测定

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脂肪细胞膜蛋白免疫技术是调节动物生长和降低脂肪沉积的有效途径。本研究以二元杂交猪为材料,采用差速离心法和密度梯度离心法,分别提取了脂肪细胞和心、肝、肺、肾、肌肉等组织细胞以及红细胞的膜蛋白,采用考马氏亮蓝染色法测定各种膜蛋白的浓度,并对膜蛋白进行了变性凝胶电泳比较分析;以猪背部脂肪细胞膜蛋白为抗原免疫雄性家兔,制备抗猪脂肪细胞膜蛋白血清;用酶联免疫吸附反应分析抗体效价和抗体与其它组织细胞膜蛋白的交叉反应;蛋白质免疫印迹法检测了抗体特异性。结果表明,脂肪细胞膜共有19种膜蛋白,其分子量分别为14.8、15.7、16.4.、19.1、21.3、22.9、24.8、28.1、40.4、49.9、67.9、70.6、81.5、86.9、94.0、99.0、108.4、117.2和123.5KD;脂肪细胞膜蛋白与其它组织细胞膜蛋白具有较大的差异,但也存在一些相同分子量的膜蛋白;酶联免疫吸附反应分析结果显示,抗原包被稀释度为1∶40时,吸收值(OD<,450>)最大,抗体效价可达1∶12800;抗猪脂肪细胞膜抗体与其它组织细胞膜有交叉反应,但反应性不高,反应程度从高到低依次为心脏、肝脏、肺脏、肌肉组织、红细胞和‘肾脏;生物学活性检测(石蜡切片)发现,在注射抗猪脂肪细胞膜蛋白抗血清后,注射部位的脂肪组织中脂肪细胞的体积较注射阴性血清对照猪小,部分细胞还出现解体现象,表明抗猪脂肪细胞膜蛋白抗体对猪脂肪细胞有很强的破坏作用。对试验猪进行血液检测分析表明该抗体对猪本身血液影响不大。
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