唾液/痰液中胃蛋白酶含量检测在LPRD诊断中的应用

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背景和目的:LPRD的发病率在全球逐年上升,在东西方人群中高的惊人。2002年美国耳鼻咽喉头颈外科学会(American Society of Otorhinolaryngology Head and neck surgery)[1]开始引入LPRD(laryngopharyngeal reflux disease,LPRD)的概念,认为该病与 GERD(Gastroesophageal reflux Disease,GERD)是两种不同的疾病,正式命名了 LPRD并将其作为耳鼻喉科的独立疾病。近十余年来各国研究者在LPRD的病因和发病机制、病理机制等方面做了大量的研究,证明了LPRD咽喉部黏膜损伤主要由盐酸(Hydrochloric acid,HCI)激活的胃蛋白酶所造成。正常情况下胃蛋白酶应该仅存在于胃内,不应该存在于咽喉部。食管可以表达碳酸酐酶同工酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,咽喉部粘膜上皮与食管粘膜上皮不同,不能产生足够的碳酸酐酶,对胃蛋白酶没有天然的抵抗屏障;当胃内的[H+]和胃蛋白酶原或胃蛋白酶反流至咽喉部时,咽喉部黏膜因缺乏碳酸酐酶而无法产生足够的碳酸盐来中和[H+][2],胃蛋白酶原被[H+]激活为胃蛋白酶,后者使得咽喉部黏膜受到损伤,进而出现相应的体征和临床症状。随着对LPRD发病机制的研究取得了进展,学者们对胃蛋白酶在LPRD中起的作用越来越重视,胃酸、胃蛋白酶等胃内容物经过食道而不损伤食道但能损伤耳、鼻、咽喉气道这一普遍疑惑的现象逐渐被认识。据此,如若能在患者咽喉部检测出胃蛋白酶,那么即可证明反流事件的存在。但是由于检测方法建立的滞后,至今临床医生对疑似反流疾病的相关诊断仍然采用一些并无特异性的评分法、临床经验及试验性治疗等方法,用以反证疾病与反流相关的可能性。因此,正确的诊断及治疗LPRD是耳鼻喉科医生急需解决的一大难题。到目前为止,国内可检索到的文献中提及到的胃蛋白酶检测方法次数较多的是酶联免疫吸附试验(又称酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA,简称酶联法),但该法对待检测样本的保存条件要求相对较高,检测所需时间相对较长,且在临床上并未用该法进行多中心、大样本的正常人唾液中胃蛋白酶含量的研究,尚不知健康人群唾液中胃蛋白酶的含量范围,因此ELISA只能检测胃蛋白酶含量高低,而不能根据胃蛋白酶浓度高低判断患者是否有反流发生,在临床上用ELISA法诊断LPRD还有一段路要走。近年来,除了运用ELISA检测胃蛋白酶含量外,国外已经开始应用普泰斯试剂(PEPTEST)检测胃蛋白酶浓度来诊断反流性疾病,这是一种更为快速、方便、安全的方法。本研究主要是通过比较传统方法(RFS联合RSI)诊断LPRD和采用普泰斯试剂检测慢性咽炎患者唾液/痰液中胃蛋白酶浓度方法诊断咽喉反流的差异,探讨通过普泰斯试剂检测胃蛋白酶浓度的诊断方法对咽喉反流诊断的意义,为诊断LPRD开启新的研究。方法:本实验选取2017年01月至2017年08月在我院耳鼻咽喉-头颈外科门诊以咽痒、刺激性咳嗽、频繁清嗓、咽部异物感、咽干等症状就诊的50例慢性咽炎病人,对其进行电子喉镜检查、反流检查计分量表(reflux finding score,RFS)评分、反流症状指数量表(reflux symptom index,RSI)评分,以RFS≥7分且RSI≥13分为诊断标准,将受试者分为咽喉反流组和非咽喉反流组,同时运用PEPTEST对患者行唾液/痰液胃蛋白酶浓度检测,了解反流组和非反流组患者病理性反流和生理性反流发生情况,观察咽喉反流在慢性咽炎中的发病情况,比较通过普泰斯试剂检测胃蛋白酶浓度的诊断方法较传统方法在诊断咽喉反流的敏感性和准确性的优势,明确唾液/痰液中胃蛋白酶含量检测方法对诊断咽喉反流的临床意义。本实验通过南京总医院伦理委员会审批认可,研究内容征得患者及家属同意,所有受试者均已签署知情同意书。结果:1.反流组与非反流组两组间的性别构成比、年龄、体重、身高差异无统计学意义。2.反流组、非反流组的中餐后1小时、症状明显时胃蛋白酶浓度与晨起时胃蛋白酶浓度差异有统计学意义;3.同一时间点反流组与非反流组的胃蛋白酶浓度差异有统计学意义;4.RSI、RFS分别与晨起时胃蛋白酶浓度散点图、中餐后1h胃蛋白酶浓度散点图、症状明显时胃蛋白酶浓度散点图的分布符合直线相关分布,RSI、RFS分别与晨起时胃蛋白酶浓度、中餐后1小时胃蛋白酶浓度、症状明显时胃蛋白酶浓度的相关关系有统计学意义。5.通过普泰斯试剂检测胃蛋白酶浓度的诊断方法的灵敏度为94.11%,特异度为83.33%。两种方法具有一般强度一致性。结论:1.唾液/痰液中胃蛋白酶含量检测方法与RSI联合RFS方法在LPRD的诊断上具有一致性,可以作为LPRD诊断的一种有效方法,能够代替RSI联合RFS方法。2.通过普泰斯试剂检测胃蛋白酶浓度的诊断方法作为诊断咽喉反流的新方法,能够判断反流事件的发生,区分病理性反流和生理性反流,具有安全、快速、区分反流性质等优势,更适用于临床。
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