农产品中赭曲霉毒素A与呕吐毒素的检测方法研究

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本论文对农产品中赭曲霉毒素A与呕吐毒素的检测方法研究进行了阐述。试验中分别对检测赭曲霉毒素A与呕吐毒素的高效液相色谱参数、农产品中赭曲霉毒素A与呕吐毒素的提取与净化方法、改进后的高效液相色谱法与薄层色谱法、酶联免疫吸附检测方法和我国进出口出入境检验检疫局的研究人员建立的高效液相色谱法对比试验的研究进行了探索。具体结果如下:选用谷物(大豆、小麦、大麦、玉米、大米)、酒类(白酒、啤酒)、速溶咖啡样品各8批、猪配合饲料16批。研究检测以上各种样品中赭曲霉毒素A的高效液相色谱方法,建立快速有效的前处理方法以及检测过程中适宜的实验参数,并通过回收率、精密度、重复性、稳定性试验和方法检测限来说明建立的高效液相方法是否具有较好的实用性。同时,将本试验改进的高效液相色谱法与国家标准薄层色谱法、ELISA方法、SN/T1746-2006进出口大豆、油菜籽和食用植物油中赭曲霉毒素A的HPLC检验方法进行了回收率、精密度和检测限对比。试验结果表明,在检测OTA过程中,荧光检测器的激发波长为333nm,发射波长为460nm;色谱柱柱温为30℃;采用乙腈-醋酸钠(60:40)-1g/L十六烷基三甲基溴酸铵(pH=6.0)为检测农产品中OTA的流动相,流速为1mL/min;分别选择以氯仿磷酸、1%聚乙二醇8000-5%NaHCO3和甲醇-3%碳酸氢钠(1:1)+三氯甲烷溶液作为提取谷物与猪配合饲料、酒类(白酒、啤酒)和速溶咖啡中OTA的较为优化的提取溶剂系统,选择免疫亲和柱净化法检测农产品中的OTA具有较高回收率。改进的HPLC法的检测限为0.53μg/kg(ELISA法为2.5μg/kg,SN/T法为1μg/kg);精密度实验的相对标准偏差(RSD)为0.91%;回收率实验中,大豆的回收率为90.8%~96.2%,小麦的回收率为92.5%~96%,大麦的回收率为93.0%~98.2%,玉米的回收率为92.7%~96.8%,大米的回收率为97.5%~99.2%,猪配合饲料的回收率为90.1%~97.2%,白酒的回收率≥99.0%,啤酒的回收率≥98.5%,速溶咖啡的回收率≥97.3%。从检测限、精密度和回收率对比得知,改进的HPLC法优于ELISA法、SN/T1746方法。选用谷物(大豆、小麦、大麦、玉米、大米)样品各8批、猪、鸭配合饲料样品各16批、酒类(白酒、啤酒)样品各8批。研究检测以上各种样品中呕吐毒素的高效液相色谱方法,并通过回收率、精密度、重复性、稳定性试验和方法检测限来说明建立的高效液相方法是否具有较好的实用性。同时,与国家标准薄层色谱法、ELISA方法、SN/T1571-2005《进出口粮谷中呕吐毒素检验方法液相色谱法》进行了回收率、精密度和检测限对比。试验结果表明,在检测DON过程中,紫外检测波长为220nm;色谱柱柱温选择为35℃;选择采用乙腈-水(84:16)为检测农产品中DON的流动相,流速为0.5mL/min;选择以乙腈-水(84:16)+NaCl作为提取谷物及猪鸭配合饲料、酒类(白酒、啤酒)中DON的较为优化的提取溶剂系统,选择免疫亲和柱净化法检测农产品中的DON具有较高回收率。改进的HPLC法的检测限为0.0175mg/kg(ELISA法为0.1mg/kg,SN/T法为0.040mg/kg);精密度实验的相对标准偏差(RSD)为0.36%;回收率实验中,大豆的回收率为95.6%~98.2%,小麦的回收率为93.8%~99.6%,大麦的回收率为93.0%~99.2%,玉米的回收率为95.5%~98.9%,大米的回收率为94.7%~99.9%,猪配合饲料的回收率为94.1%~99.7%,鸭配合饲料的回收率为96.5%~98.7%,白酒的回收率≥95.3%,啤酒的回收率≥98.8%。从检测限、精密度和回收率对比得知,改进后的HPLC法优于ELISA法、SN/T1571方法。由上述试验得知,改进后的的检测农产品中OTA与DON的HPLC方法,其检测限、精密度、回收率、重复性均良好,为我国检测各种农产品的农产品检测实验室提供了值得借鉴的检测方法。
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