【摘 要】
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本研究以小叶杨为实验材料,根据不同无性系的特性进行了扩繁,在同一水平条件下对扩繁实验材料进行不同程度的干旱胁迫后,提取叶片总RNA,逆转录成cDNA,利用DREB1A引物进行PCR扩增,电
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本研究以小叶杨为实验材料,根据不同无性系的特性进行了扩繁,在同一水平条件下对扩繁实验材料进行不同程度的干旱胁迫后,提取叶片总RNA,逆转录成cDNA,利用DREB1A引物进行PCR扩增,电泳检测扩增产物,得到约800bp的片段。对扩增出的片段进行纯化、回收,并将其克隆到pGEM-T easy载体上,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,蓝白斑初步筛选重组子,重组率达93%。分别挑选蓝斑(作为对照)和白斑过夜培养,提取质粒DNA,稀释100倍为模板进行PCR检验,结果表明只有重组子白斑得到了PCR产物,比较其大小发现和前PCR产物相似。对菌体进行序列分析,测序结果表明该克隆包含一个完整的开放读码框,编码一个由251个氨基酸构成的多肽,将测序结果与Genbank数据进行比对,结果提示与拟南芥DREB1A基因序列同源性为87%。由此可以初步说明,本实验已从杨树中分离到了与抗干旱相关的基因DREB1A,为今后从木本植物中分离抗逆基因提供了宝贵的经验,同时在利用基因工程技术提高林木抗逆性方面探索了新的研究途径。
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