论文部分内容阅读
目的:通过前期研究发现,六味地黄膏摩具有促进脑瘫(cerebral Palsy,CP)患儿生长发育的功效,能够缩短康复疗程,但分子机制不清,本实验拟通过检测脑瘫幼鼠模型的外周与中枢生长抑素(SS)和生长激素释放激素(GHRH)蛋白表达情况,探索六味地黄膏摩促进CP幼鼠生长发育的分子机制,为六味地黄膏摩发明专利的临床推广奠定实验基础。方法:本实验按照研究标准从115只正常SD幼鼠中筛选出60只雄性幼鼠,随机分为模型组(n=40)空白对照组(n=10)和假手术组(n=10),模型组于幼鼠出生第三日(P3)采用左侧颈总动脉结扎联合缺氧的方法制备脑瘫幼鼠模型,假手术对照组仅切开幼鼠颈部皮肤,分离左侧颈总动脉(幼鼠背侧观左侧动脉)后缝合皮肤伤口,不做其他处理,空白对照组不作任何处理,将造模成功的30只SD幼鼠随机分为三个亚组:六味地黄膏摩实验组(n=10)、润肤油对照组(n=10)、模型对照组(n=10)。六味地黄膏摩组采用六味地黄膏作为推拿介质进行推拿干预,润肤油对照组采用市售的强生婴儿润肤油作为推拿介质进行推拿干预。空白对照组、模型对照组及假手术对照组不予推拿治疗,仅在六味地黄膏摩组和润肤油推拿组推拿时与母鼠分笼饲养。各组在相同的时间点观测并记录幼鼠的体重、身长+尾长、睁眼时间,进行步态分析、负向趋地考试,取材检测外周血液、中枢下丘脑SS、GHRH的蛋白表达,采用SPSS统计软件单因素方差分析(One-Way ANOVA)、独立样本T检验(IndePendent SamPles T-Test)进行统计学比较分析,P<0.05时,差异具有统计学意义;P<0.01时,差异具有显著统计学意义。结果:1.造模后,进行翻正实验验证造模情况,模型组翻正时间为12.91±6.25s,与假手术对照组(1.42±0.34s)比较,P<0.01时,差异具有显著统计学意义。模型组与空白对照组(1.64±0.29s)比较,P<0.01时,差异具有显著统计学意义。2.经过4周推拿干预后,六味地黄膏摩组体重114.92±2.78g,与润肤油对照组(99.93±4.42g)比较,P<0.01,差异具有显著统计学差异。六味地黄膏摩组与模型对照组(87.79±3.26g)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组(111.87±3.17g)比较,P<0.05,差异具有统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(112.15±3.21g)比较,P<0.05,差异具有统计学意义。经过4周推拿干预后,六味地黄膏摩组身长+尾长为30.93±0.34cm,与润肤油对照组(28.80±0.54cm)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与模型对照组(26.54±0.80cm)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组(30.57±0.68cm)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(30.54±0.72cm)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组睁眼时间为14.30±0.48d,与润肤油对照组(14.90±0.31d)比较,P<0.05,差异具有统计学意义。六味地黄膏摩组与模型对照组(16.30±0.48d)比较,P<0.05,差异具有统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组(11.80±0.42d)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(11.90±0.31d)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。3.经过4周推拿干预后,通过步态分析评定幼鼠运动功能,六味地黄膏摩组离地速度(5.02±0.80s),与润肤油对照组(3.77±0.56s)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义,六味地黄膏摩组与模型对照组(3.60±0.51s)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组(4.58±0.73s)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(5.15±0.57s)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组步态分析足步幅长度(11.90±0.57mm),与润肤油对照组(9.67±0.33mm)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与模型对照组(8.11±0.54mm)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术(12.11±1.01mm)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(11.41±1.17mm)比较,P>0.05,差异无统计学意义。经过4周推拿干预后,采用负向趋地检测幼鼠的运动反应能力,六味地黄膏摩组(1.35±0.27s),与润肤油对照组(1.96s±0.18s)比较,P<0.05,差异具有统计学意义,六味地黄膏摩组与模型对照组(2.37±0.17s)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组(1.43±0.16s)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(1.35±0.12s)比较,P>0.05,差异无统计学意义。4.通过4周推拿干预,六味地黄膏摩组外周SS分泌表达91.248±24.457ng/ml,与润肤油对照组(110.664±7.814ng/ml)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与模型对照组(122.520±59.617ng/ml)比较,P<0.05,差异具有统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组为(90.188±28.466ng/ml)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(88.314±22.27ng/ml)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组脑瘫幼鼠外周GHRH分泌表达为17.804±0.794ng/ml,与润肤油对照组(17.107±1.311ng/ml)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与模型对照组(10.829±0.404ng/ml)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩与假手术对照组(18.328±0.897ng/ml)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与空白对照组(18.453±1.281ng/ml)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组中枢SS表达与内参蛋白比值0.0245±0.008,与润肤油对照组(0.716±0.041)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与模型对照组(0.967±0.127)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组(0.386±0.316)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组空白对照组(0.390±0.008)比较,P<0.01,差异具有显著统计学意义。六味地黄膏摩组脑瘫幼鼠中枢GHRH与内参蛋白比值为1.005±0.101,与润肤油对照组(0.850±0.082)比较,P>0.05,差异无统计学意义。六味地黄膏摩组与模型对照组(0.420±0.070)比较,P<0.01,差异具有显著性统计学意义。六味地黄膏摩组与假手术对照组(0.601±0.956)比较,P<0.01,差异具有显著性统计学意义。六味地黄膏摩与空白对照组(0.612±0.226)比较,P<0.01,差异具有显著性统计学意义。结论:1.六味地黄膏摩可促进CP幼鼠的生长发育,实验结果与前期文献报道一致。2.六味地黄膏摩可以改善CP幼鼠的运动能力,实验结果与前期文献报道一致。3.六味地黄膏摩促进CP幼鼠生长发育、改善运动功能的作用可能通过下调外周及中枢SS蛋白以及上调外周及中枢GHRH蛋白表达,进而调控生长激素(Growth Hormone,GH)的释放。