三株好氧反硝化菌的分离鉴定及特性研究

来源 :广东海洋大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:kongshuai19900505
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好氧反硝化菌在生物除氮中具有重要作用,但相关研究的文献报道较少。本文从自然环境中分离具有高效去除亚硝态氮活性的好氧反硝化菌,并对其生理生化及降解亚硝态氮特性进行研究。从沿海滩涂、红树林、虾塘、植物根系等活性淤泥中采集样品,利用反硝化培养基和硅胶平板进行好氧反硝化菌的分离。从各种活性淤泥中分离得到11株好氧反硝化菌,根据各菌株的脱氮效果优选活性较好的三株菌作进一步的试验。通过对三株菌的显微镜观察、生化试验、16S rDNA序列分析,初步鉴定为:菌株F4属于假单胞菌(Pseudomonas sp.),菌株F6属于副球菌(Paracoccus sp.),菌株F7属于假单胞菌(Pseudomonas sp.)。研究发现,三株好氧反硝化菌在好氧条件下均具有较好的反硝化活性,当亚硝态氮初始浓度为2500mg/L时,菌株F4、F6和F7在48h内的亚硝态氮去除率分别达到47%、64%和45%。以反硝化培养基(DM)为基础,添加不同的碳源、氮源和金属离子,设计不同的碳氮比(C/N)、pH值、温度、盐度和亚硝态氮浓度等生态因子,探讨这些因子对三株菌反硝化活性的影响,结果表明:三株菌均能利用酒石酸钾钠、乙酸钠、丁二酸钠、枸橼酸钠作为唯一碳源,而三株菌以酒石酸钾钠为碳源时反硝化活性最高;在C/N小于12的情况下,三株菌的反硝化活性随着C/N的增加而快速升高;三株菌均嗜好弱碱性环境(pH89);三株菌的反硝化活性在温度25℃30℃时最好;当亚硝态氮浓度为1000mg/L3000mg/L时,三株菌的反硝化活性随着亚硝态氮浓度的逐渐升高而持续下降;不同种类及浓度的金属离子对三株菌的反硝化活性影响不同,其中Pb2+、Hg2+和Cr7+对三株菌的降解亚硝态氮活性有很强的抑制作用,低浓度的Cu2+、Zn2+和Fe3+对活性有激活作用。用牛津杯双层平板定量扩散法检测三株菌代谢产物的抑菌活性,结果表明:三株菌对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均没有抑制作用;通过药敏试验发现,菌株F6对多数抗菌素敏感,菌株F4和F7对多种抗菌素不敏感;通过气相色谱质谱仪(GC/MS)分析菌株F4的胞外代谢产物,表明其胞外代谢产物中含有色素物质,初步确定该物质为菌绿素。利用正交试验设计,对菌株F6进行培养基和培养条件的优化。最终得出培养基的优化组合是:酒石酸钾钠2%、KNO20.25%、K2HPO40.6‰、MgSO4·7H2O0.25‰、MnSO4·H2O0.01‰;培养条件的优化组合是:培养温度为30℃;接种量为5%;摇床180r/min培养48h。用适当浓度的海藻酸钠、粉末活性炭、CaCl2包埋菌株F6制备固定化小球,用罗非鱼及其养殖水体进行了应用试验,结果表明:制备好氧反硝化菌固定化小球的最佳组合是:海藻酸钠为主要载体,浓度为4%,添加1.5%粉末活性炭和4%CaCl2溶液;固定化菌株F6对亚硝态氮的降解效果明显优于游离菌,能显著提高罗非鱼的增重及超氧化物歧化酶的活性,且能提高养殖水体pH值。
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