龙血竭（Dragon’s blood）是一种具有良好镇痛作用的传统药物。我们前期研究发现龙血竭可以抑制电压门控钠电流和辣椒素诱导的TRPV1受体电流,说明龙血竭对电压门控钠通道和TRPV1通道的调控可能是其镇痛药理作用的原因。接着我们又发现龙血竭的黄酮提取部位（total flavonoids of Dragon’s blood,TFD）也对电压门控钠电流和辣椒素诱导的TRPV1电流有抑制作用,这种抑制作用类似龙血竭,提示TFD可能是龙血竭调控电压门控通道和TRPV1通道的有效部位。后来进一步的研究发现TFD的三种黄酮成分剑叶龙血素A（cochinchinenin A,CA）、剑叶龙血素B（cochinchinenin B,CB）和龙血素B（loureirin B,LB）同样可以调控电压门控钠电流和辣椒素诱导的TRPV1电流,且三者的组合对这两种电流的调制作用类似TFD,提示这三种黄酮成分可能是TFD通过调控这两种通道的药效成分。经过在体动物实验研究,发现龙血竭和TFD可以提高小鼠热刺激痛阈,减少小鼠甩尾的痛阈反应时间,减少冰醋酸导致的扭体反应次数,进一步证明了龙血竭及TFD与上述机制相关的药理作用。在接下来的实验中,我们继续探究龙血竭总黄酮及其成分相关的镇痛药理机制。除了电压门控钠通道和TRPV1通道,酸敏感离子通道（Acid-sensing ion channels,ASICs）也是痛觉信号的传递重要途径之一,是近些年药物镇痛药理研究的新靶点。有研究表明异黄酮类物质葛根素可能是通过调控ASIC通道产生镇痛作用,因此本文设计实验,拟从细胞酸敏感离子通道、动物疼痛实验和ASIC蛋白表达三个方面研究TFD及其成分的组合的镇痛作用与ASIC通道的关系,探究它们在体内的作用机制。用全细胞膜片钳技术记录龙血竭总黄酮对DRG细胞上ASICs电流的作用,探究TFD是否作用于ASIC通道,结果显示TFD可以抑制DRG细胞ASICs电流（P<0.001）,其半效抑制浓度(IC₅₀)是（0.0013±0.0003）%,说明TFD可以调控DRG细胞中ASICs电流。在疼痛模型实验中,通过小鼠福尔马林实验和辣椒素痛觉实验探究TFD的镇痛活性。在大鼠左脚注射完全弗氏佐剂（complete Freund’s adjuvant,CFA）诱导的慢性炎症疼痛,通过热板法刺激给药部位确定TFD的镇痛作用。结果显示TFD对福尔马林和辣椒素引起的疼痛有显著抑制作用,对CFA诱导的炎性痛也有显著抑制作用,此前有研究表明ASIC通道与炎性痛觉敏化相关,由此我们推测TFD的镇痛药理作用与对ASIC通道的调控密不可分。然后我们从TFD的成分及组合的药理作用探究对ASIC通道的作用。用全细胞膜片钳技术记录CA、CB和LB分别作用于背根神经细胞上ASICs流的作用,探究这三种成分是否作用于ASIC通道,结果显示LB能抑制瞬时态ASICs电流,其IC₅₀是89.7±5.8μmol/L,而CA和CB对瞬时态ASICs电流没有影响,三者均可抑制持续ASICs电流,IC₅₀分别是100.4±4.3μmol/L,128±6.9μmol/L和315.2±10.1μmol/L,说明这三个成分是TFD调控DRG细胞中ASIC通道的药效成分。在大鼠急性炎性痛模型中,用热板法探究三种成分及其组合对炎性痛的药理作用,同时给急性炎性模型大鼠注射组合和ASIC激活剂（GMQ）,探究ASIC通道是否与急性炎性痛相关,在CFA诱导的急性炎症疼痛实验中,CA和LB组有显著镇痛效果,CB没有镇痛作用,组合在同样的浓度下比单体成分的镇痛效果更好,说明三者在抑制炎性疼痛过程中起协同作用,这种镇痛作用可以被ASIC激活剂抑制,说明组合通过调控ASIC通道产生镇痛作用。有研究表明ASIC3在慢性炎性痛中有重要作用,因此提取给与组合的慢性炎性痛模型大鼠的背根神经,通过免疫组化方法标记ASIC3蛋白和c-Fos蛋白,从蛋白层面观察组合对ASIC3的调控。结果显示ASIC3蛋白和c-Fos蛋白的表达降低（P<0.001）,说明组合在炎性疼痛过程中下调ASIC3蛋白的表达。从以上实验结果提示,TFD可能是通过调控背根神经细胞ASIC通道干预疼痛信号传递,产生外周镇痛效果,CA、CB和LB三者的组合是TFD镇痛的药效物质,这种镇痛作用是通过调控背根神经细胞ASIC3受体干预疼痛信号传递。