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目的:开展益气解毒方对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞免疫功能的影响研究,探索益气解毒方抗鼻咽癌的药理机制,揭示益气解毒方的药效物质基础,指导临床合理用药。此外,本研究在阐明益气解毒方的配伍规律,优化制剂工艺,制定质控标准方面也具有重要意义。方法:(1)用适宜的化学、物理方法提取制备益气解毒方各目标成分,对组成益气解毒方七味药各自的有效成分及药理活性进行分析,将总多糖、总皂苷、总黄酮、总生物碱等四大类成分作为提取目标,同时采用可见-紫外分光光度法对各目标成分进行含量测定。(2)MTT法检测益气解毒方各目标成分对RAW264.7细胞增殖活性的影响,筛选能显著增强RAW264.7细胞活性的成分物质。(3)ELISA法检测益气解毒方水提物和总多糖对RAW264.7细胞TNF-α、IL-12及NO分泌水平的影响。(4)Western blot法检测益气解毒方水提物和总多糖对RAW264.7细胞NF-κBp65蛋白表达量的影响。结果:(1)提取20副,即1260g益气解毒方药材可得水提总浸膏128.63g(浸膏得率10.21%),醇提总浸膏168g(浸膏得率13.33%),总多糖样品14.49g(浸膏得率1.15%),总皂苷样品13.99g(浸膏得率1.11%),总黄酮样品20.6g(浸膏得率1.63%),总生物碱样品14.97g(浸膏得率1.19%);总多糖样品中总多糖含量为74.8%,总皂苷样品中总皂苷含量为67.4%,总黄酮样品中总黄酮含量为60.39%,总生物碱样品中总生物碱含量为61.32%。(2)MTT实验表明,益气解毒方水提物5个浓度组(10,20,40,80,160,320 mg.L-1)和益气解毒方总多糖5个浓度组(5,10,25,50,100,200 mg?L-1)均对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的活性有不同程度的增强作用;而益气解毒方醇提物、益气解毒方总皂苷、益气解毒方总黄酮、益气解毒方总生物碱的各自5个浓度组别中,有的促进小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞的增殖,有的则抑制。(3)ELISA实验表明,益气解毒方水提物5个浓度组(10,20,40,80,160,320 mg?L-1)和益气解毒方总多糖5个浓度组(5,10,25,50,100,200 mg?L-1)均能刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-12及NO。(4)Western blot结果表明,益气解毒方水提物5个浓度组(10,20,40,80,160,320mg.L-1)和益气解毒方总多糖5个浓度组(5,10,25,50,100,200 mg?L-1)分别处理小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞24小时后,在样品内参GADPH蛋白量表达基本不变的情况下,均能明显上调NF-κBp65蛋白的表达水平。结论:益气解毒方水提物和益气解毒方总多糖可调控RAW264.7细胞的免疫活性。研究结果提示,益气解毒方水提物和总多糖可能是通过激活NF-κB信号通路,相应激活TNF-α、IL-12、NO等细胞因子的基因表达,从而促进TNF-α、IL-12、NO等细胞因子的分泌,增强巨噬细胞的免疫功能。这可能是益气解毒方发挥抗鼻咽癌作用的药理学机制之一。