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丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙型肝炎的病原体,HCV感染常常导致慢性持续性感染,最终导致肝硬化甚至肝癌,但关于其致病及宿主免疫防御机制还不是很清楚。核因子κB(NF-κB)是一种重要的细胞核转录因子,能调节大量基因特别是免疫应答和炎症反应相关基因的转录,在许多免疫和炎症反应的调节中起着重要作用,同时也影响着细胞的生长、分化、凋亡、癌变和个体发育等,功能涉及到许多生理、病理过程。 本论文研究了HCV的Core和NS5A两种蛋白与NF-κB信号途径的关系,目的是探索HCV致病的分子机制。 首先我们构建了core基因的重组真核表达质粒pcDNA-△core519、pcDNA-△core474、pcDNA-△core(76-573)、pcDNA-△core(76-474)和NS5A基因的重组表达质粒p3NS5A,将各个重组质粒单独与NF-κB报告质粒pNF-κB-Luc或是将core基因质粒和p3NS5A混合后与报告质粒共转染转染Cos-7、HeLa和Huh7三种细胞系,检测它们对NF-κB活性的影响,同时用Western-blot和间接免疫荧光实验检测了蛋白的表达定位情况。虫荧光素酶实验表明Core蛋白能够在Huh7细胞中激活NF-κB,且其N端1-25氨基酸为其NF-κB激活功能所必需的,其C端的疏水性区域对其NF-κB激活功能也有一定的影响;Core蛋白在Huh7细胞中对NF-κB的激活作用是剂量依赖性的。但Core蛋白在Cos-7和HeLa细胞中对NF-κB活性没有明显影响,表明Core蛋白对NF-κB激活是有细胞选择性的;NS5A蛋白单独在三种细胞系中对NF-κB活性都没有影响,但它能增强全长Core蛋白在Huh7细胞中对NF-κB的激活作用,但对缺失的Core蛋白的突变体没有增强作用,表明NS5A只能和全长Core蛋白作用;并且NS5A蛋白对Core蛋白对NF-κB激活的增强作用与NS5A的蛋白量在一定范围内呈相关性。 同时用Westem-blot检测了Core蛋白和NS5A蛋白在Huh-7细胞系中单独或共表达时NF-κB/p65,NF-κB/p50和IκB-α三种NF-κB相关因子的表达情况。结果表明Core蛋白和NS5A蛋白的表达没有提高NF-κB蛋白表达水平,而是引起了IκB-α的降解,推测其引起的NF-κB的激活是由与促进IκB-α磷酸化从而被降解而导致的。 我们的研究结果表明NS5A蛋白对Core蛋白激活NF-κB具有协同作用,HCV