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胶质瘤是临床最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤,它本质上是一种多基因异常疾病,通过一种或多种癌基因的过度表达、同时伴随抑癌基因的突变缺失从而使信号传导通路异常,肿瘤细胞逃逸了正常生长调控机制,结果出现细胞的异常增殖、自主侵袭、血管增生等恶性表型。Mettl9基因是新发现的一个p53下游基因,在肺癌、小鼠胎肺和SD大鼠中枢神经系统的发育过程中特异性表达,且该基因表达信号的强弱与凋亡细胞的强弱成正相关,其在胚胎发育过程中的作用很可能是通过参与细胞凋亡来实现的。因此,本研究中,我们观察不同表达水平的Mett19基因对胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨及作用机制。目的:1.研究Mett19基因的不同表达水平对U251细胞生长的影响;2.探讨Mett19基因对U251生长的作用机制。方法:应用RT-PCR方法,扩增出Mett19基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体上并测序,再将该基因亚克隆至慢病毒载体pLenti6.3-MCS-IRES-EGFP,在293T细胞进行病毒包装,构建Mettl9基因的慢病毒过表达载体;根据RNA干扰序列设计原则,设计RNA干扰靶点序列,合成含干扰序列的双链DNA oligo,通过酶切连接构建Mett19基因的RNAi干扰载体。实验分为五组:正常培养细胞组,慢病毒空载体组(NC),慢病毒过表达载体组(Mett19组),干扰载体对照组(NC-RNAi组),Mett19干扰载体组(Mettl9-RNAi组)。将上述已经构建的各质粒分别瞬时感染或转染U251细胞,48h后,荧光显微镜观察GFP绿色荧光表达情况,qRT-PCR检测Mett19基因的表达水平,以此评价病毒感染或质粒转染后Mett19基因的表达效率;收集各组细胞,MTT方法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR方法检测凋亡相关因子Bcl-2, Bax mRNA的表达水平。结果:1.Mettl9cDNA的RT-PCR扩增产物连接到pGEM(?)-T载体,测序结果向GenBank递交获得收录号HQ898855;2.成功构建了Mett19基因的慢病毒过表达载体和RNAi干扰载体;3.荧光显微镜下可见GFP绿色荧光的表达阳性率约为50%,感染Mett19慢病毒过表达质粒,Mett19的表达水平明显高于NC对照组);而转染Mettl9-RNAi组,Mett19的表达水平明显低于NC-RNAi组;4.MTT结果显示,感染Mett19慢病毒过表达质粒组,细胞增殖能力明显降低;而转染Mettl9-RNAi组,细胞增殖能力明显增加;5.流式细胞术结果显示,感染Mett19慢病毒过表达质粒组,细胞凋亡率明显增加;而转染Mettl9-RNAi组,细胞凋亡率明显降低);6.qRT-PCR结果显示,感染Mett19慢病毒过表达质粒组,凋亡相关因子Bcl-2mlNA的表达水平降低,Bax mRNA的表达水平明显升高,差异具有统计学意义;而转染Mettl9-RNAi组,凋亡相关因子Bcl-2mRNA的表达水平升高,Bax mRNA的表达水平明显降低,差异具有统计学意义。结论:过表达Mett19基因抑制U251细胞增殖,促进其凋亡,可能与Bcl-2mRNA表达水平下降,Bax mRNA表达水平升高有关。