两种来源人胎盘间充质干细胞CD200的差异表达对小鼠皮肤移植免疫调节作用的研究

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目的研究两种来源的人胎盘间充质干细胞CD200的表达差异在小鼠皮肤移植免疫调节中的作用及作用机制,为临床上选择更好的抑制免疫排斥的干细胞提供一定理论依据。方法分离两种来源细胞;流式细胞术检测间充质干细胞表面标志分子等的表达情况;流式细胞抗体中和高表达CD200分子的细胞、携带CD200基因的腺病毒载体及腺病毒空载体分别转染低表达CD200分子的细胞,将等量PBS及上述处理过的细胞通过尾静脉注射入将ICR乳鼠皮肤移植至C57BL/6背部建立的皮肤移植免疫排斥模型小鼠体内,统计各组皮肤存活时间;术后第7天,HE染色法观察小鼠移植部位炎性细胞浸润情况;RT-PCR法检测小鼠脾脏中IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-10基因的相对表达量;眼眶静脉取血,检测各组小鼠血液中白细胞的含量;ELISA法检测血液中相应免疫因子的含量。结果胎儿侧来源细胞CD200阳性率明显高于母体侧。与PBS组比较:m PMSC组和f PMSC组移植皮肤存活时间均明显延长;与f PMSC+anti-CD200组比较:f PMSC组移植皮肤存活时间明显延长;与m PMSC+腺病毒空载体组比较:m PMSC+CD200腺病毒组移植皮肤存活时间明显延长。HE结果显示:细胞移植组炎性细胞的浸润数量明显少于PBS组。RT-PCR结果显示:与PBS组比较:m PMSC组IL-17、IFN-γ、TNF-α的相对表达量,f PMSC组TNF-α的相对表达量明显降低,f PMSC组IL-10的相对表达量明显升高;与m PMSC组比较:f PMSC组IFN-γ、TNF-α的相对表达量均明显降低;与f PMSC组比较:f PMSC+Anti-CD200组IL-17、TNF-α的相对表达量,f PMSC+Anti-CD200组IFN-γ的相对表达量均明显升高;与m PMSC+CD200腺病毒载体转染组比较:m PMSC+腺病毒空载体转染组TNF-α、IFN-γ的相对表达量均明显升高,m PMSC+腺病毒空载体转染组IL-17的相对表达量明显升高,m PMSC+腺病毒空载体转染组IL-10的相对表达量明显降低。ELISA结果与RT-PCR结果相符。结论f PMSC抑制小鼠皮肤移植免疫排斥作用优于m PMSC;与其更强的抑制免疫细胞的增殖、分化以及成熟,从而更有效的调节免疫因子IL-17、IFN-γ、TNF-α、IL-10等的分泌有关;f PMSC更适于临床上作为抑制皮肤移植免疫排斥的种子细胞。
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