脂联素对MG-63细胞AMPK、ACC磷酸化和增殖的影响

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目的:本研究主要探讨人脂联素重组体(Adiponectin)对MG-63细胞单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(Adenosine monophosphate activated protein kinase, AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl carboxylase, ACC)磷酸化和细胞增殖的影响。方法:选择处于对数生长期的MG-63细胞、SaOS-2细胞、hFOB1.19细胞,提取蛋白后Western Blot检测三种细胞脂联素受体1(Adiponectin receptor1, AdipoRl)的表达水平。将对数生长期的骨肉瘤细胞株MG-63中分别加入5ml含脂联素的培养基(浓度1ug/ml),处理不同的时间,Western Blot检测AMPK、ACC蛋白磷酸化水平,选择最佳的脂联素处理时间;根据脂联素最佳处理时间,选择不同浓度的脂联素作用于呈对数生长的MG-63细胞Western Blot检测AMPK. ACC磷酸化水平,确定脂联素最佳作用浓度。依据最佳作用时间及最佳浓度,将PBS作为对照,相应浓度脂联素作处理组,Western Blot检测AMPK、ACC磷酸化水平,明确脂联素对骨肉瘤MG-63细胞AMPK、ACC磷酸化的影响。CCK-8法检测脂联素对MG-63细胞增殖的影响。结果:与正常成骨细胞hFOB1.19相比,骨肉瘤细胞株MG-63细胞和SaOS-2细胞AdipoRl水平显著增高(MG-63细胞:P=0.001;SaOS-2细胞:P=0.001);脂联素对MG-63细胞最佳作用时间30min(P=0.005),最佳作用浓度0.1ug/ml(P=0.007),与对照组相比,脂联素组可以显著促进MG-63细胞AMPK(P=0.001)、ACC(P=0.001)磷酸化;短时间内(24h)脂联素对MG-63细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05)。结论:AdipoR1在骨肉瘤细胞中表达水平高于正常成骨细胞;一定浓度的脂联素可以增强AMPK、ACC的磷酸化,短时间刺激脂联素对MG-63细胞增殖无明显抑制作用。
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