论文部分内容阅读
安宫牛黄丸具有清热解毒、清痰开窍的功效,主要用于治疗脑卒中、昏迷、高热昏厥等,是临床上急症用药的品种。牛黄为其君药,主要含有胆汁酸类成分(胆酸、牛黄胆酸等),现代研究表明:胆汁酸类成分具有较好的抗炎、抗菌等药理作用。黄芩苷(baicalin,BA)是中药黄Suutellaria baicalensis.Georgi的主要成分,属于黄酮类化合物,具有较强的药理活性:抗炎、抗氧化、清除自由基,对心脑血管系统和神经系统保护等作用。但由于黄芩苷水溶性与脂溶性以及血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)透过性较差,影响了黄芩苷在脑部疾病中的应用。目的:为改善黄芩苷的稳定性及脑靶向性,利用胆酸“药辅合一”的特点及脂质体载药系统的优点,将胆酸-黄芩苷共同制备脂质体。通过胆酸-黄芩苷脂质体(CA-BA-LP)在脑缺血再灌注中的药效学观察,评价其疗效,验证将胆酸和黄芩苷共同制备脂质体后,胆酸具有“药辅合一”的特点,两者在一定程度上能协同缓解脑缺血再灌注损伤。通过CA-BA-LP对鼻纤毛的毒性作用,评价CA-BA-LP对鼻腔给药的毒性作用。方法:1.以包封率及载药量为评价指标,通过薄膜分散法、逆向蒸发法、泡腾分散法筛选出最佳的制备工艺;单因素考察胆酸的加入顺序、胆酸的含量、磷脂药物比、磷脂胆固醇比、水化体积等因素对包封率及载药量的影响。2.在单因素的基础上,用响应面Box-behnken Design进一步优化制备工艺。3.用Zetasizer 3000粒度测定仪测定脂质体的粒径与Zeta电位,透射电镜观察脂质体外观结构;采用不同模型方程,用origin8.5拟合黄芩苷溶液和胆酸黄芩苷脂质体的体外释放曲线;在4℃条件下储藏45d,观察脂质体的稳定性。4.将大鼠分为假手术组、模型组(MACO)、黄芩苷单体组(BA)、胆酸+黄芩苷单体组(CA-BA)、胆酸黄芩苷脂质体组(CA-BA-LP),从神经行为学评分、脑水肿含量、TTC染色、脑梗死面积、HE染色等方面评价胆酸-黄芩苷脂质体对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。5.通过对蟾蜍的鼻纤毛毒性实验,评价胆酸黄芩苷脂质体的鼻腔毒性。结果:1.制备方法筛选结果表明:逆向蒸发法制备的胆酸黄芩苷脂质体包封率及载药量最高。2.通过单因素实验及响应面Box-behnken Design优化,得出最佳制备工艺:磷脂胆固醇比4.55:1(w/w),磷脂药物比7.23:1(w/w),胆酸9.06mg,胆酸的加入方式为将胆酸加入磷脂与胆固醇的混合相中,超声时间10min,超声温度20±5℃,水化体积1mL。3.CA-BA-LP外观为淡黄色混悬液,经过一定稀释后,在光照下呈现淡蓝色乳光;透射电镜下观察为球形或类球形纳米粒,平均包封为44.1%,平均载药量为5.05%,粒径在130~160nm,Zeta电位-8.53~-7.28mv,体外释放符合双相动力学方程,表明CA-BA-LP有缓释作用;4℃条件下储藏,5d之内包封率及载药量未有明显变化,20d时两者均有所下降。4.药效学结果:BA组、CA-BA组、CA-BA-LP组给药后在神经行为学评分、脑水肿含量、脑梗死面积方面均有所降低,表明黄芩苷对脑损伤有一定的保护作用;CA-BA-LP组给药后疗效优于BA组、CA-BA组(P<0.05);HE染色表明黄芩苷可以改善脑缺血的病理状况,将胆酸+黄芩苷制成脂质体后,可以增强其治疗效果。5.鼻纤毛实验结果:CA-BA-LP的纤毛运动时间相对百分数大于85%,对鼻纤毛无明显毒性,具有一定的安全性。结论:逆向蒸发法制备的胆酸黄芩苷脂质体的包封率及载药量最好,其体外释放曲线符合双相动力学特征,具有缓释作用;CA-BA-LP的药效学实验表明:黄芩苷对缺血性脑损伤有保护作用,将胆酸和黄芩苷共同制备脂质体后,其治疗效果优于黄芩苷单体,两者在一定程度上具有协同作用。鼻纤毛毒性实验表明:CA-BA-LP对鼻纤毛无明显毒性,可用于鼻腔给药,为后期CA-BA-LP鼻腔给药的研究提供依据。