论文部分内容阅读
目的:探讨小剂量5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对卵清蛋白(ovalbumin,OVA)诱导的哮喘小鼠Th2炎症反应和气道高反应性(airways hyperresponsiveness,AHR)的影响。方法:1.致敏前腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的影响选取15只雌性野生型(wild type,WT)BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、PBS干预哮喘组和致敏前小剂量5-FU干预哮喘组,每组5只。PBS干预哮喘组和致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠于第0天、14天,腹腔注射OVA与氢氧化铝混合液(OVA 20μg;Alum 2 mg)致敏,第21天、22天、23天,OVA(100μg)滴鼻激发,正常对照组用等体积PBS干预;致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠在第0天致敏前1天腹腔注射小剂量的5-FU(50mg/kg),正常对照组和PBS干预哮喘组小鼠腹腔注射等体积的PBS。第24天,苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)和过碘酸-雪夫(Periodic Acid-Schiff,PAS)染色观察小鼠肺组织炎性细胞浸润和气道杯状细胞增生情况;瑞氏-姬姆萨复合染液分类计数各组小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞;小鼠BALF上清液中的IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平和小鼠血清中OVA特异性Ig E水平用酶联免疫法(Enzyme linked immunosorbent assays,ELISA)检测。用有创肺阻抗法测定小鼠的AHR。2.激发前腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的影响选取15只雌性野生型WT BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、PBS干预哮喘组和激发前小剂量5-FU干预哮喘组,每组5只。PBS干预哮喘组和激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠于第0天、14天,腹腔注射OVA与氢氧化铝混合液(OVA 20μg;Alum 2 mg)致敏,第21天、22天、23天,OVA(100μg)滴鼻激发,正常对照组用等体积PBS干预;激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠在第21天激发前1天腹腔注射小剂量的5-FU(50mg/kg),正常对照组和PBS干预哮喘组小鼠腹腔注射等体积的PBS。第24天,HE和PAS染色检测肺组织气道炎症和杯状细胞增生;瑞氏-姬姆萨复合染液分类计数各组小鼠BALF细胞;小鼠BALF上清液中的IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平和小鼠血清中OVA特异性Ig E水平用ELISA检测。用有创肺阻抗法测定小鼠的AHR。3.激发后腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的影响选取15只雌性WT BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、PBS干预哮喘组和激发后小剂量5-FU干预哮喘组,每组5只。PBS干预哮喘组和激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠于第0天、14天,腹腔注射OVA与氢氧化铝混合液(OVA20μg;Alum 2 mg)致敏,第21天、22天、23天,OVA(100μg)滴鼻激发,第24天,激发后小剂量5-FU干预哮喘组腹腔注射小剂量的5-FU(50mg/kg),PBS干预哮喘组腹腔注射等体积的PBS。第25天、26天、27天,PBS干预哮喘组和激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠再次OVA(100μg)连续滴鼻激3天。正常对照组用等体积的PBS干预。第28天,HE和PAS染色检测肺组织气道炎症和杯状细胞增生;瑞氏-姬姆萨复合染液分类计数各组小鼠BALF细胞;小鼠BALF上清液中的IL-4、IL-5、IL-13、IFN-γ水平和小鼠血清中OVA特异性Ig E水平用ELISA检测。用有创肺阻抗法测定小鼠的AHR。4.腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠炎性树突状细胞(inflammatory DCs,inf DCs)数量的影响选取15只雌性WT BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、PBS干预哮喘组和小剂量5-FU干预哮喘组。小剂量5-FU干预哮喘组小鼠在第21天激发前1天腹腔注射小剂量的5-FU(50mg/kg),正常对照组和PBS干预哮喘组小鼠腹腔注射等体积的PBS。第24天采用流式细胞仪检测小鼠肺inf DCs(CD11c~+MHCII~+CD64~+细胞)的数量。结果:1.致敏前腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的影响HE染色提示正常对照组小鼠肺组织气道无炎症,PBS干预哮喘组小鼠肺组织气道可见管腔狭窄以及大量炎性细胞浸润,致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺组织及气道周围炎性细胞浸润较哮喘组小鼠减轻;正常对照组未见PAS~+细胞,致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺组织气道基底膜PAS~+细胞数量少于PBS干预哮喘组(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠BALF的细胞总数以及嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数明显高于对照组(P<0.01);与PBS干预哮喘组比较,致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠BALF的细胞总数以及嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数明显减少(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠BALF上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平明显高于正常对照组(P<0.01),而PBS干预哮喘组小鼠BALF上清液中IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.01);与PBS干预哮喘组比较,致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠BALF上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平降低(P<0.01),而IFN-γ水平无统计学差异(P>0.05)。PBS干预哮喘组小鼠血清中OVA特异性Ig E水平明显高于正常对照组(P<0.01),致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠血清中OVA特异性Ig E水平低于PBS干预哮喘组小鼠(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠气道阻力(RL)明显高于正常对照组(P<0.01);致敏前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠RL低于PBS干预哮喘组小鼠(P<0.01),但动态肺顺应性(Cdyn)三组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.激发前腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的影响HE染色提示正常对照组小鼠肺组织气道无炎症,PBS干预哮喘组小鼠肺组织气道可见管腔狭窄以及大量炎性细胞浸润,激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺组织及气道周围炎性细胞浸润较PBS干预哮喘组小鼠减轻;正常对照组未见PAS~+细胞,激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺组织气道基底膜PAS~+细胞数量少于PBS干预哮喘组(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠BALF的细胞总数以及嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数明显高于对照组(P<0.01);与PBS干预哮喘组比较,激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠BALF的细胞总数以及嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数明显减少(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠BALF上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平明显高于正常对照组(P<0.01),而PBS干预哮喘组小鼠BALF上清液中IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.01);与PBS干预哮喘组比较,激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠BALF上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平降低(P<0.01),而IFN-γ水平无统计学差异(P>0.05)。PBS干预哮喘组小鼠血清中OVA特异性Ig E水平明显高于正常对照组(P<0.01),激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠血清中OVA特异性Ig E水平低于PBS干预哮喘组小鼠(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠RL明显高于正常对照组(P<0.01);激发前小剂量5-FU干预哮喘组小鼠RL低于PBS干预哮喘组小鼠(P<0.01),但Cdyn三组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。3.激发后腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠气道炎症及气道高反应性的影响HE染色提示正常对照组小鼠肺组织气道无炎症,PBS干预哮喘组小鼠肺组织气道可见管腔狭窄以及大量炎性细胞浸润,激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺组织及气道周围炎性细胞浸润较哮喘组小鼠减轻;正常对照组未见PAS~+细胞,激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺组织气道基底膜PAS~+细胞数量少于PBS干预哮喘组(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠BALF的细胞总数以及嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数明显高于对照组(P<0.01);与PBS干预哮喘组比较,激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠BALF的细胞总数以及嗜酸性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数明显减少(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠BALF上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平明显高于正常对照组(P<0.01),而PBS干预哮喘组小鼠BALF上清液中IFN-γ水平低于正常对照组(P<0.01);与PBS干预哮喘组比较,激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠BALF上清液中IL-4、IL-5和IL-13水平降低(P<0.01),而IFN-γ水平无统计学差异(P>0.05)。PBS干预哮喘组小鼠血清中OVA特异性Ig E水平明显高于正常对照组(P<0.01),激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠血清中OVA特异性Ig E水平低于PBS干预哮喘组小鼠(P<0.01)。PBS干预哮喘组小鼠RL明显高于正常对照组(P<0.01);激发后小剂量5-FU干预哮喘组小鼠RL低于PBS干预哮喘组小鼠(P<0.01),但Cdyn三组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。4.腹腔注射小剂量5-FU对OVA诱导的哮喘小鼠inf DCs数量的影响正常对照组、PBS干预哮喘组和小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺inf DCs占肺单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)的比例分别为:(0.24±0.06)%、(0.70±0.06)%、(0.40±0.04)%;小剂量5-FU干预哮喘组小鼠肺inf DCs的数量低于哮喘组(P<0.01),但高于正常对照组(P<0.01)结论:在哮喘的致敏阶段或激发阶段或哮喘急性发作期用5-FU干预均能抑制哮喘小鼠Th2炎症反应和AHR,5-FU对哮喘炎症的抑制作用可能与其诱导哮喘小鼠肺inf DCs数量减少有关。