布鲁氏菌病为动物源性疾病,是由细胞内寄生的布鲁氏菌引起的传染-变态反应性人兽共患传染病,在世界范围内广泛流行,对畜牧养殖业的发展和人类健康造成严重威胁,已成为重要的公共卫生问题。布鲁氏菌病的诊断方面存在两个主要的问题:一是快速准确诊断,二是现有减毒活疫苗的鉴别诊断。PCR检测技术避免操作活菌,并能检测到标本中较低丰度的病原,适合布鲁氏菌这种高危险性病原的检测。用PCR方法对布鲁氏菌病早期、复发期以及伴随多种并发症的患者及药物治疗后患者进行诊断,具有较好的应用前景,我国目前尚无应用PCR检测方法在临床诊断上跟踪随访的研究报道。本研究针对布鲁氏菌的保守基因bp26设计了属的引物,针对插入性序列IS711设计了牛、羊、猪种引物,建立了单重和多重PCR检测方法,在临床上对免疫学诊断为患者、可疑患者和非患者人群进行检测,并结合流行病学个案数据库资料拟定了进一步跟踪随访检测的对象,为建立人布鲁氏菌病标准化PCR诊断方法提供研究依据。目前应用血清学方法不能区分布鲁氏菌减毒疫苗株的反应与自然感染,发展基因标记疫苗可解决这一问题。M5是我国广泛应用的减毒活疫苗株,本研究应用基因同源重组方法,用卡那抗性基因替换部分bp26基因,构建了bp26突变株,并根据布鲁氏菌的保守基因建立了能够区分bp26突变株与疫苗株的PCR鉴别方法。bp26突变株在胞内外的生存能力显示,bp26突变株在小鼠体内的免疫应答和免疫保护效果均低于M5疫苗株,表明bp26基因在M5疫苗株的免疫保护作用中发挥了作用。考虑到bp26基因在免疫原性和保护性方面的重要性,我们对BP26蛋白进行了表达及纯化,并致力于开发有效的布鲁氏菌亚单位疫苗和作为人布鲁氏菌病血清学的特异性诊断抗原用于临床诊断研究。