【摘 要】
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磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要行为之一,在生命调节中起着不可或缺的作用。异常的磷酸化蛋白/磷酸肽是很多疾病的生物标志物,所以磷酸化蛋白质组学的研究则显得尤为重要。
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磷酸化是蛋白质翻译后修饰的重要行为之一,在生命调节中起着不可或缺的作用。异常的磷酸化蛋白/磷酸肽是很多疾病的生物标志物,所以磷酸化蛋白质组学的研究则显得尤为重要。质谱通常用于对磷酸化蛋白/磷酸肽的定性分析。由于磷酸化蛋白/磷酸肽的低通量、难电离、以及容易受到非磷酸化蛋白/非磷酸肽的信号干扰,直接对其进行分析较为困难,有必要在质谱分析前对磷酸化蛋白/磷酸肽进行分离富集。因此迫切需要开发出合成简便且高效的吸附材料用于磷酸化蛋白/磷酸肽的富集。为了实现对目标物分析物的分离富集,本论文在课题组前期工作的基础上进行创新,即选取阿仑膦酸钠作为更为简单的鳌合配体,设计了以四氧化三铁(Fe3O4)磁性纳米粒子为基质的两种不同类型的新型吸附剂,并深入研究了其性能。1.采用溶剂热法合成Fe3O4磁性纳米粒子,在其表面包覆多巴胺后以Fe3O4@PDA作为二级反应平台修饰阿仑膦酸钠,最后鳌合Ti4+制得目标吸附剂。使用红外光谱、X射线光电子能谱、X射线粉末衍射和透射电镜等手段对吸附剂进行表征。重点研究了吸附剂对标准蛋白(β-酪蛋白和卵清蛋白)的吸附性能和动力学行为,通过改变溶液p H值和盐浓度考察其对吸附剂的影响,实验结果表明吸附剂是通过金属配位方式进行吸附,并且吸附行为更符合朗缪尔模型和准二级动力学模型。同时与对照吸附剂Fe3O4@PDA-Ti4+进行了比较,着重从吸附剂与目标蛋白的结合强度,吸附容量以及吸附过程中吸附剂的稳定性方面(Ti4+的流失量)进行研究。最后,使用吸附剂成功从实际样品(鸡蛋和牛奶)中分别选择性分离富集出卵清蛋白和β-酪蛋白,表明本文制备的吸附剂在生物应用方面具有潜在应用价值。2.采用溶剂热法制备Fe3O4磁性纳米粒子,在其表面包覆一层二氧化硅以提高材料亲水性,引入苄基氯型硅烷化试剂,以键合阿仑膦酸钠金属鳌合配体,最后鳌合Ti4+制得目标吸附剂。使用扫描电镜、红外光谱、热重分析等手段分别对吸附剂进行表征。研究了吸附剂对β-酪蛋白酶解液中磷酸肽的性能,并探究了上样条件中乙腈比例对磷酸肽富集情况的影响。同时,通过在标准混合蛋白样品中的实际应用对吸附剂的选择性进行了考察。最后,使用吸附剂从实际样品中选择性富集磷酸化蛋白,证明了本论文所制备的吸附材料具有良好的选择性和实用性。
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