海洋放线菌聚酮合酶基因的扩增及分析

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聚酮合酶是一类复杂的多酶体系,能够催化聚酮类化合物的生物合成,聚酮类化合物具有重要的生物医药价值。本文拟从大连海域筛选出海洋放线菌,从其基因组DNA中扩增出聚酮合酶基因片段,并对其进行生物信息学分析,希望能够对聚酮合酶的结构与功能以及应用提供理论依据。主要结果如下:1.从大连海域海泥中筛选一株海洋放线菌,根据培养方式及培养条件和外部形态特征的显微镜所观察,参考《伯杰细菌鉴定手册》初步鉴定为海洋链霉菌,暂定名为Streptomyces sp L1。2.设计聚酮合酶特异扩增引物,从L1基因组DNA扩增出目的片段,测序结果表明所插入的片段长度为307bp,反向插入到pMD19-T载体中的,与预期的目的片段的大小基本一致。3.根据一级结构分析可知:拟表达蛋白质的分子式为C441H714N142O127S3,分子量为10133.58Da,不稳定指数为85.35,属于较不稳定的蛋白质,GRAVY为-0.233,属于亲水蛋白质,且该拟蛋白没有信号肽和跨膜结构域的存在。据二级结构分析可知:α-螺旋结构(Alpha helix)占4.08%、延伸链(Extended strand)占22.45%、无规则卷曲占(Random coil)73.47%。
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