半滑舌鳎和塞内加尔鳎干扰素调节因子基因的克隆与表达分析

来源 :中国海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xjl982050
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
我国是水产养殖大国,其中海水养殖鱼类作为养殖业的一大类取得了快速的发展。近几年,半滑舌鳎和塞内加尔鳎作为一种新型的海水养殖种类而迅速发展起来。目前,我国海水养殖业中仍然存在着各种问题,再加上病害的日益严重,已成为制约我国海水养殖鱼类发展的关键问题,给半滑舌鳎和塞内加尔鳎的养殖业带来了较大的经济损失。干扰素调节因子作为多功能转录因子在干扰素的转录调控、病原体的免疫反应等方面起着重要的作用。因此,对半滑舌鳎和塞内加尔鳎干扰素系统的研究在其病毒性疾病的防治方面有重要的意义。本文分别选取半滑舌鳎和塞内加尔鳎为研究对象,采用反转录聚合酶链式反应的方法并结合同源克隆技术和cDNA序列末端快速扩增技术,分别克隆得到了半滑舌鳎IRF-1、IRF-2、IRF-7和塞内加尔鳎IRF-1、IRF-2、IRF-7基因的全长cDNA序列。半滑舌鳎IRF-1全长cDNA序列共1456bp,开放阅读框(ORF)全长810bp,编码269个氨基酸,5’非翻译区长105bp,3’非翻译区长541bp;其基因组DNA全长3008bp,共包括10个外显子和9个内含子。半滑舌鳎IRF-2基因的cDNA全长1620bp,包含89bp的5’非翻译区,999bp的开放阅读框,532bp的3’非翻译区,其中ORF包含332个氨基酸残基的多肽。半滑舌鳎IRF-7基因的cDNA全长为1957bp,包含48bp的5′-非翻译区、1302bp的开放阅读框和607bp的3′-非翻译区,其中开放阅读框编码433个氨基酸残基的多肽。塞内加尔鳎IRF-1的cDNA全长1631bp,包含143bp的5’非翻译区、600bp的3’非翻译区和888bp的开放阅读框,其中开放阅读框编码295个氨基酸残基的多肽,其基因组DNA序列全长3480bp,包含10个外显子和9个内含子序列。塞内加尔鳎IRF-2基因的cDNA全长1923bp,包含84bp的5’非翻译区、987bp的开放阅读框和852bp的3’非翻译区,其中开放阅读框编码328个氨基酸残基的多肽。塞内加尔鳎IRF-7cDNA全长2220bp,包含64bp的5’非翻译区、1287bp的开放阅读框和3’非翻译区包含869bp,其中开放阅读框编码428个氨基酸的多肽。氨基酸序列分析表明,与其它硬骨鱼类相似,半滑舌鳎和塞内加尔鳎IRF-1、IRF-2和IRF-7基因的氨基酸序列都包含一典型结构特征——DNA结合域;另外,IRF-2的氨基酸序列还包括转录活化域和转录抑制域,IRF-7的氨基酸序列还包含IRF相关域和丝氨酸富含域。氨基酸序列比对结果表明,半滑舌鳎和塞内加尔鳎与其它硬骨鱼类的IRF-1、IRF-2和IRF-7均具有较高的同源性。系统进化表明,半滑舌鳎和塞内加尔鳎IRF-1和IRF-2同属于IRF-1亚家族,但处在两个不同的分支上,而半滑舌鳎和塞内加尔鳎IRF-7属于IRF-7亚家族。为了解IRF-1、IRF-2和IRF-7基因在健康半滑舌鳎和塞内加尔鳎各组织中的转录特征,我们利用RT-qPCR方法分别测定了半滑舌鳎和塞内加尔鳎肝、肾、脾、心脏、肠、血细胞和鳃等7个组织的目的基因的转录水平。研究结果表明,IRF-1、IRF-2和IRF-7基因在半滑舌鳎和塞内加尔鳎这些组织中均有转录。其中IRF-1基因在半滑舌鳎和塞内加尔鳎血细胞中转录水平量最高,其次是在半滑舌鳎的鳃、脾、肠和塞内加尔鳎的心脏、鳃、肠中次之;IRF-2基因在半滑舌鳎各组织中的相对转录水平都较低,而在塞内加尔鳎的鳃和肠中表达量较高;IRF-7在半滑舌鳎和塞内加尔鳎的肠中表达量最高,其次在半滑舌鳎的心脏、肾和脾以及塞内加尔鳎的脾和鳃中表达量也较高。为进一步探究IRF-1、IRF-2和IRF-7基因在半滑舌鳎和塞内加尔鳎抗病过程中的免疫应答机制,也为探索IRF-1、IRF-2和IRF-7在鱼体内的表达模式及在诱导后的变化水平,我们选取试验鱼的肾、脾、肠和鳃为研究对象,检测了三种IRFs基因在注射poly(I:C)后第6h、12h、24h、48h、72h、96h、120h的相对转录水平。研究结果发现,经过poly(I:C)感染后四个组织中的IRF-1、IRF-2和IRF-7基因转录水平均上调,并呈现出一定的规律性,即在感染后第6h开始升高,在第24h或48h分别达到最大值,随着时间的延长又恢复到初始水平。这些结果表明IRF-1、IRF-2和IRF-7在鱼类的抗病毒反应中起着重要的作用。
其他文献
摘 要 冰壶运动是集健身娱乐和竞技于一体的运动项目,随着技术水平和战术布局的提高,运动员在比赛过程中是否取得胜利跟心理素质有着至关重要的因素。在这种情况下,如何分析运动员心理障碍和调控方法是运动员在比赛中取得胜利的重中之重。  关键词 冰壶运动员 心理障碍 心理调控  2014年索契冬奥会中国队与瑞典队争夺铜牌过程中,中国队接连出现失误而输掉比赛,这也表明中国队心理压力过大导致失误。如果平时训练不
摘 要 随着我国社会经济发展水平的不断提高,我国体育事业也得到了快速的发展,而足球运动作为体育项目发展的重要组成部分,在我国体育事业的发展中发挥着重要的作用,并且受到了社会的广泛关注和高度重视。因此,本文从足球进攻和足球防守两个方面,对室内五人制足球的战术特征进行分析探究。  关键词 室内五人制 足球战术 特征研究  室内五人制足球是足球运动的重要组成部分,是一种足联的比赛项目,它主要随着十一人制
摘 要 高山滑雪作为体育娱乐健身活动中的组成部分,因具备刺激、休闲、健身、惊险等特点,赢得很多青少年的喜爱,目前,开展率已经越来越高。但是,由于我国很多高山滑雪场地、器材等方面建设与准备还不够完善,导致青少年滑雪者运动损伤问题不断发生。所以,高山滑雪运动损伤问题已经成为当前亟待解决的问题,本文针对青少年高山滑雪运动损伤的原因进行分析,并对其做出相应的预防与急救方案,为降低运动损伤几率以备参考。  
摘 要 正确认识并解决运动员的心理问题是确保运动员竞技水平正常发挥和良好运动成绩取得的重要前提。因此,本文就针对青少年赛艇运动员常见赛前心理问题的致因和调节方法等问题进行了分析。文章首先分析了青少年赛艇运动员常见的几种赛前心理问题,即:过分紧张、赛前焦虑、赛前冷漠以及盲目自信,并在此基础之上,从内在和外在两个层面分析了上述几种赛前心理问题出现原因,提出了相对应的调节方法。  关键词 青少年赛艇运动
摘 要 恐水是游泳教学训练中常见的一种不良的心理现象,一旦出现,往往会影响学生对技术动作的学习与掌握,大大增加游泳教学的难度。因此,本文就对游泳教学训练中学生恐水心理的成因和克服策略进行了研究。文章首先分析了容易引发学生恐水心理的身体素质层面、游泳技术层面以及环境层面和教师层面的原因,然后又在此基础之上,提出了注意提高学生对游泳教学训练的认识,帮助学生树立学习的信心;提前带领学生熟悉教学场地和教学
近年来,卵形鲳鲹(Trachinoms ovatus)的人工养殖在我国南部沿海地区迅速发展,为该地区海水网箱养殖鱼类的主要种类之一,产生了良好的经济效益和社会效益。本课题以卵形鲳鲹为
摘 要 运动员选材是运动训练的重要组成部分,是培养运动员成才的必经之路,是运动员创造优异成绩的基础。本文阐述了选材在女子花剑项目中的重要意义,界定了击剑选材的内涵,并且归纳出击剑运动科学选材的益处。  关键词 选材 女子花剑 运动员  击剑运动起源于欧洲,被称作具有“绅士风度”的运动。但由于它技术复杂、战术性很强,是对速度、灵敏素质要求较高的运动项目。随着人们对击剑项目越来越多的关注,击剑项目的选
摘 要 机体在受到低氧、缺氧及缺氧训练的双重刺激下会对机体产生多方面的影响,会对心血管系统产生较大的影响。作者期望本文为探讨低氧训练环境下对心血管系统的影响提供理论依据,为改善人体的心血管功能提供帮助。  关键词 低氧训练 心血管系统 影响  一、低氧训练的概念及训练方法  (一)低氧训练的具体概念  低氧训练是指在一个运动训练周期中持续或间断利用高原自然低氧或人工低氧环境,同时配合及运用运动训练