【摘 要】
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减毒沙门氏菌作为疫苗载体可以运送表达的外源抗原至宿主免疫系统,激发机体产生特异性体液、细胞(包括CD4~+T细胞、CTL等)和粘膜免疫应答。目前,虽然减毒沙门氏菌作为疫苗载
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减毒沙门氏菌作为疫苗载体可以运送表达的外源抗原至宿主免疫系统,激发机体产生特异性体液、细胞(包括CD4~+T细胞、CTL等)和粘膜免疫应答。目前,虽然减毒沙门氏菌作为疫苗载体的可行性得到确认,但迄今减毒沙门氏菌或重组沙门氏菌激发机体产生免疫应答的机理还不尽清楚,尤其是在诱导细胞免疫应答方面的机理还需进一步研究。对于特异性细胞免疫应答的检测方法有多种,其中酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot assay, ELISPOT)是近年来用于检测细胞因子,评价T淋巴细胞功能和特异性的一种新方法。由于该法特异性强、敏感度高,因此已广泛用于分析和评价特异性CD8~+T细胞免疫应答的研究中。在本研究中,为了进一步研究减毒沙门氏菌运送外源抗原诱导细胞免疫应答的机制,首先建立了检测特异性细胞免疫的ELISPOT法,并运用该法分析了携带卵清白蛋白(OVA)和淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒核蛋白(LCMV NP)CD8~+T细胞表位的减毒鼠伤寒沙门氏菌诱导的细胞免疫应答规律。 1、检测重组沙门氏菌特异性细胞免疫应答的ELISPOT法建立 为建立检测重组沙门氏菌特异性细胞免疫的ELISPOT法,先构建了融合表达OVA257～264aa(H-2~b)、LCMVNP118～132aa(H-2~d)CD8~+T细胞表位和绿色荧光蛋白(GFP)的原核表达质粒ptG2F,通过电穿孔法转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,获得重组菌SL7207(ptG2F)。以1×10~6cfu剂量的重组菌静脉注射免疫
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