褐飞虱flightin和TnC4基因初步分析

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褐飞虱是我国水稻上最重要的害虫之一,具有翅二型性。Flightin和TroponinC4(TnC4)都是昆虫肌肉组成相关蛋白,其中flightin最初是在果蝇间接飞行肌(indirect flight muscle, IFM)上被发现,它与肌浆球蛋白(myosin)紧密结合,指导粗肌丝的正确组装,对肌肉伸展活性具有重要作用。TnC4是TroponinC的一种亚型,专门与Ca2+结合,促进肌动蛋白和肌球蛋白互作,从而使肌肉发生收缩。这两种蛋白对维持肌肉的结构和功能起到了重要的作用,但其在褐飞虱长、短翅间的表达差异和功能并不清楚。本研究以褐飞虱cDNA为模板,通过PCR和3’RACE克隆得到褐飞虱flightin基因ORF,长度为630bp,可编码含209个氨基酸残基的蛋白,预测分子量为25.49kDa;同时克隆了TnC4基因,ORF为459bp,可编码含152个氨基酸残基的多肽,预测分子量17.42kDa。氨基酸同源性比对发现,flighttn相对保守,TnC4高度保守,且在N末端保守区域有1个Ca2+结合位点。通过原核表达flightin和TnC4基因,回收蛋白分别制备了2个蛋白的多克隆抗体。我们利用RT-PCR、western blot等技术发现flightin和TnC4在长翅褐飞虱中表达量明显大于短翅中的表达量,且二者都从成虫期开始表达,主要位于胸部组织中。免疫荧光定位实验进一步表明,flightin和TnC4仅存在于胸部IFM组织中。通过显微注射的方法对3龄褐飞虱进行RNA interference (RNAi), flightin和TnC4在mRNA水平上表达明显下调。褐飞虱被干扰后进行飞行测试,其飞行能力基本丧失。本论文验证了flightin和TnC4在长、短翅褐飞虱体内的表达差异,为研究褐飞虱翅肌发育和翅型分化打下了基础。同时,利用RNAi技术成功干扰相关基因表达,使褐飞虱丧失飞行能力,这对褐飞虱迁飞研究和防治都将具有潜在价值。
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