单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D的表达和功能检测

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目的:构建包含单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D的克隆载体及表达载体;将HSV-I gD基因在毕赤酵母菌GS115株中表达,挑选稳定高效表达株,建立酵母表达系统;将表达产物作为包被抗原,建立一种特异性和灵敏性较高、简便、快速的ELISA方法,从而为快速准确地诊断、治疗HSV感染和疫苗的研制与开发奠定基础.方法:根据GeneBank中HSV-I gD的保守序列,设计引物,通过PCR扩增包膜糖蛋白gD全基因,将目的基因先克隆至于pMD18T载体上,建立克隆载体,测序并用BLAST软件进行同源序列比较,观察核酸以及氨基酸变异情况;目的基因经双酶切与酵母表达载体pGAPZαA连接,测序以确定其序列,利用TmPred和Swiss-Model软件预测其跨膜区及三维结构,分析氨基酸变异及α信号肽与组氨酸尾的表达对HSV-I gD蛋白抗原性的影响;用LiCl法将线性化的重组表达质粒转导入毕赤酵母GS115株,建立酵母表达系统;表达产物以Western Blot进行鉴定,将重组抗原包被ELISA板,对临床血清进行检测,并对结果进行评价.
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