目的意义：Ndr2基因是1999年从正常人全脑cDNA文库中克隆到的新基因[GenBank登录号AFl59092]染色体定位于14q12.1，基因组中由15个内含子，16个外显子构成。Ndr2基因的cDNA全长为2024bp，编码357个氨基酸的蛋白质，分子量约41kD。目前研究表明，Ndr2基因在多种肿瘤组织或细胞系如结肠癌、胶质瘤、白血病、淋巴瘤和腮腺癌中无表达或低表达，相反在上述肿瘤相应的正常组织细胞中有较高水平的表达。另外在中枢神经系统的大脑皮质、白质、神经核，唾液腺上皮细胞和骨骼肌细胞中高表达。同时基因转染实验表明，Ndr2可抑制胶质瘤BT325细胞由G1期向S期的过渡，因此，推测Ndr2可能是一种新的抑癌基因。本研究的目的意义是探讨Ndr2基因在肺癌发病机制中的作用，确定Ndr2基因的功能，为肺癌的防治提供理论依据。 方法：采用RT-PCR，Westem blot和免疫组织化学方法确定Ndr2在正常组织和肺癌组织的表达。利用蜕皮素诱导的哺乳动物真核表达载体，将Ndr2 第四车医人学博士lr2上 基因构建到I匕载体pmD中，同时将含NdlZ 基因的融合载体转染肺8＆癌GLC｛2 细胞，经过鉴定确定NdrZ基因的成功转染。MTT法观察转染肺腺癌GLC－82 细胞的生长情况。细胞集落实验观察细胞表型的改变。流式细胞仪测定转染 肺腺癌CLC－82细胞的细胞周期变化。通过V尼stem blot观察细胞周期素＊ 在NdrZ基固转染肺腺癌 GLC－82细胞和空载体转染肺腺癌 GLC－82细胞的表 达差异。通过腺病毒p53基因转染肺腺癌 AX9细胞，观察p】基因对Ndl·2 基因表达的影响c 结果：经过RT－PCR方法提取正常肺组织的总RNA，反转录为CDNA，PCR 结果显示NdrZ在所检测的不同正常肺组织都有高表达。在正常肺组织中NdrZ 基因高表达；而其相应的肺癌组织呈现低表达或无表达，26例鳞癌中，有9 例无表达，8例4th达，9例高表达。14例腺癌中，4仔IJ无表达；3例低表达， 7例高表达。11例小细J腑癌有 4例无表达；3例4th达，4例高表达。正常 肺组织和肺癌的NdrZ表冰盯匕差异显著；P＜001。Western blot和免疫组织化 学方法进一步证实了这一结果。免疫组织化学结果显示NdrZ蛋白在正常气道 上皮细胞、平滑肌细胞、软骨细胞、浆液腺细胞、肺泡细胞胞浆中有高表达。 结果显示＊山2的表达与肺癌的分化相关，4例低分化鳞癌和二例低分化腺癌 冲瘤组织＊山二均无表达。3例高分化鳞癌和2例高分化腺癌与其正常肺组织 相比，NdrZ均高表达、19例中分化鳞癌中，有 5 ｛IJ无表达，8例低表达，6 例高表达。10例中分l匕腺癌，2例无表达；3伶低表达，5例高表达。11例 JJ、 细Ktw癌有4例无表达，3例fib达；4例高表达。另外，N山二的表达与肺癌 分期相关，在 40例 NSCLC中，6例 1期肺癌有 l伸J4th达。12例 11期肺癌 中 4例 NdrZ无表达，3例4ha达，5例高表达。22如1 Ill期肺癌中有 9伊J NdrZ 无表达，7例fto达，6例高表达。在门 例 SCLC中，l例 11期肺癌中 NdrZ 高表达。8 ｛Fd Ill期肺癌中 2 ｛II NdrZ无表达；3 ｛FJ｛Mi达，3 ｛FJ高表达，2 ｛FJ IV 期肺癌 NdrZ Jb无表达。 5 第四军医大学博士论文 利用蜕皮素诱导的哺乳动物真核表达载体转染NdrZ基因的肺腺癌GLC－82 细胞经过鉴定，NdrZ基因成功转染到肺腺癌GLC－82细胞内，蜕皮素诱导后 NdIZ基固得到高表达。M”IJ”法测定和细胞集落实验显示转染NdrZ基因的肺 腺癌＊＊G82细胞在蜕皮素诱导后，细Bbe殖受到抑制。流式细胞仪结果显示 NdrZ转染细胞存在GO／GI期细胞明显增多，NdrZ转染肺腺癌 GLC－82细胞 GO心1期细胞百分率为“．4O％，GZ－M期为6．刀％，S期为27．89％c而空载体 pmD季染肺腺癌 GLC－82 i田胞GO／GI期细胞百分率为 52．67O，GZ－A4期为 17．84地S期为29叩％。提示NdrZ能够通过细胞周期阻滞抑制肿瘤细胞增殖。 V乍stem Mot结果显示NdrZ转染肺腺癌GLC－82细胞的细胞周期素DI表达比 空载体转染肺腺癌hCE2 i邮胞的表达明显减弱。将腺病毒载体p53基因转染 肺腺癌 A刃9细胞，发现p53的表达能够上调NdrZ的表达。 结论：NdrZ在正常肺组织中高表达，而在肺癌组织中出现｛明达或无表 达。明确了NdrZ蛋白在正常气道上皮细胞、平滑肌细胞、软骨细胞、浆液腺 细胞、肺泡细胞胞浆中有高表达。NdrZ能够抑制肺腺癌 GLC七2细胞的增殖； 并能产生＊期阻滞，抑制细胞周期素＊的表达。p53的表达能够上调NdrZ 的表达。本研究的结果进一步支持NdrZ基因是一种新的抑癌基因；在肺癌中