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随着人们生活水平的不断提高，消费者和生产者越来越重视猪肉的品质。衡量猪肉品质的一个重要的指标是肌内脂肪（IMF）的含量，它对肉的嫩度、多汁性和风味有明显的正效应，目前关于调控猪肌内脂肪沉积的机理还不清楚，主效基因还没有确定。PID1基因在脂肪细胞增殖中起重要作用，在肥胖人群中呈高丰度表达。本实验室研究了PID1基因在莱芜猪、鲁莱黑猪、大白猪三个猪种的背膘、背最长肌和肝脏中的表达差异以及与IMF的关系，提示PID1基因可能与IMF的沉积密切相关。本研究通过构建小鼠模型的方式，构建以U6启动子控制下能产生针对PID1的短发夹环状小干扰RNA表达载体，将干扰载体转染进C2C12成肌细胞中，采用RT-PCR和Western blot方法检测shRNA干扰载体对C2C12细胞中PID1mRNA和蛋白表达的下调作用，为进一步研究验证PID1基因影响IMF沉积的功能奠定基础。为了构建和筛选对小鼠PID1（phosphotyrosine interaction domain containing1,PID1）基因RNA干扰的PID1-shRNA表达载体。根据小鼠PID1cDNA序列，优化设计4条shRNA序列以及1条阴性干扰序列，相应的双链DNA被插入pGPU6/GFP/Neo载体中，即pGPU6/GFP/Neo-shRNA-A、pGPU6/GFP/Neo-shRNA-B、pGPU6/GFP/Neo-shRNA-C、pGPU6/GFP/Neo-shRNA-D和pGPU6/GFP/N eo-shRNA-NC。将干扰载体转染C2C12细胞，采用RT-PCR和Western blot检测shRNA对C2C12细胞PID1mRNA和蛋白表达的下调作用。结果表明：靶向PID1基因的4个shRNA重组质粒载体经测序分析，shRNA编码序列与设计的片段完全一致，经酶切凝胶电泳证实载体构建成功。构建的4个表达载体分别转染C2C12细胞，24h后细胞中PID1基因mRNA表达水平依次下调(23.58±1.87)%、(75.44±0.77)%、(70.52±0.41)%和(56.60±3.13)%。48h后细胞中PID1蛋白表达水平依次降低(30.15±5.05)%、(71.86±4.85)%、(67.93±2.28)%和(56.81±2.01)%。研究筛选出的pGPU6/GFP/Neo-shRNA-B、pGPU6/GFP/Neo-shRNA-C和pGPU6/GFP/Neo-shRNA-D表达载体能高效抑制转染细胞PID1mRNA和蛋白的表达，为进一步研究验证PID1基因的功能奠定了基础。