草间钻头蛛体内Wolbachia的分子检测及对宿主生殖的影响

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liuqingq
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草间钻头蛛Hylyphantes graminicola是棉田中数量最多的蜘蛛。本论文首次进行了Wolbachia感染对蜘蛛生殖及适合度的影响研究,并通过草间钻头蛛的交配行为检测到Wolbachia可以通过交配方式进行传播,为以后进一步开展蜘蛛Wolbachia的研究提供了理论与实验依据。本论文的主要研究结果如下:1草间钻头蛛体内Wolbachia的感染检测及遗传多样性分析所检测的14个地理种群(新乡、菏泽、五指山、洛阳、高陵、陵水、西双版纳、武鸣、石家庄、太谷、南京、肥东、兴山、武汉)的草间钻头蛛均有Wolbachia感染,其中河南新乡草间钻头蛛Wolbachia的感染率最高,达到52.94%,山东菏泽的次之,为45.45%,Wolbachia感染率较低的草间钻头蛛主要分布在安徽肥东(8.62%)、湖北兴山(8.1%)和湖北武汉(7.69%)。对测序得到的7个地理种群共69个wsp基因片段用软件DnaSP4.10进行多态性位点分析,结果表明,总有效位点数565个,不变位点数380个,可变位点数185个。遗传距离分析显示同一地理种群Wolbachia品系的wsp基因遗传距离并不全都接近零或等于零,不同地理种群的Wolbachia品系之间也会出现遗传距离极小或为零。对7个地理种群Wolbachia wsp序列的单倍型进行遗传多样性分析结果显示,五指山(WZS)种群的单倍型多样度最高(0.90000),平均核苷酸差异度最大(83.70000),核苷酸多样性最高(0.45243)。AMOVA(Analysis of Molecular Variance)分子方差分析的结果表明,84.96%的遗传变异存在于种群内个体间,遗传分化是极显著的(Fst=0.15042,P<0.01)。2草间钻头蛛体内Wolbachia的多位点序列分型Wolbachia多位点序列分型结果显示,11个地理种群的Wolbachia品系分别属于10个不同的Wolbachia ST (sequence type),且这10个ST是Wolbachia MLST数据库中新出现的序列类型。其中洛阳(LY)和菏泽(HZ)具有完全相同的ST。Wolbachia系统发育分析(GarliML.MP和Bayesian分析)结果显示,8个ST(ST-177,ST-178,ST-179,ST-180,ST-181,ST-182,ST-183 and ST-184)属于Wolbachia B组,2个ST属于Wolbachia A组(ST185和ST186)。通过ARLEQUIN 3.1中的Mantel软件对不同地理种群草间钻头蛛COI遗传距离和相应的Wolbachia两两遗传距离的相关性分析结果显示,Wolbachia品系的两两遗传距离与宿主的COI遗传距离间相关性显著(r2=0.394,p=0.013,p<0.05)。而宿主的地理距离与Wolbachia品系遗传距离之间相关性分析结果显示二者没有明显的相关性(r2=0.027,p=0.665,p>0.05),宿主地理距离与宿主的线粒体COI遗传距离相关性分析显示二者相关性不显著(r2=0.027,p=0.135,p>0.05)。3 Wolbachia对草间钻头蛛生殖及适合度的影响对草间钻头蛛4种交配方式的研究结果表明,♀+×(?)-、♀-×(?)+、♀+×(?)+和♀-×(?)-4种不同交配形式的各个交配对都能正常地交配和产卵(♀+表示感染Wolbachia的雌蛛;(?)-表示未感染的雄蛛;♀-代表未感染的雌蛛;(?)+代表感染的雄蛛),而且产的卵都能正常发育,即♀-×(?)+之间没有发生细胞质不亲合性。对感染与未感染Wolbachia的草间钻头蛛产卵量、卵历期和卵孵化个体数的统计分析结果显示,感染与未感染Wolbachia的草间钻头蛛第一个卵袋卵孵化历期有显著差异(P<0.01)。两种方法去除草间钻头蛛体内Wolbachia的结果显示,浓度为1 Omg/ml四环素盐酸盐的水溶液饲喂草间钻头蛛50d后,40%的草间钻头蛛去除了Wolbachia共生菌。浓度为3.75mg/ml的草间钻头蛛人工饲料喂养草间钻头蛛50d后,50%的被处理蜘蛛个体去除了体内共生菌Wolbachia。4 Wolbachia水平传递方式的研究未感染Wolbachia的草间钻头蛛捕食感染有Wolbachia的果蝇,Wolbachia感染检测结果表明:捕食后2h、12h、24h、48h、72h的草间钻头蛛均未检测出Wolbachia感染。以感染Wolbachia的单雌系果蝇为饲料,把草间钻头蛛从二龄喂养至成熟,50头草间钻头蛛的Wolbachia感染检测结果均显示未感染。这一结果表明草间钻头蛛通过捕食Wolbachia阳性的果蝇不可能获得Wolbachia感染。水稻田节肢动物群落Wolbachia的感染检测结果也未获得关于捕食传播的生态学及分子生物学证据。通过设置两组草间钻头蛛交配对♀+×(?)-、♀-×(?)+,Wolbachia交配传播研究的结果显示,通过宿主的交配行为,Wolbachia既可由感染的雌性草间钻头蛛传递给未感染的雄性草间钻头蛛,也可由感染的雄性传递给未感染的雌性。
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