乳腺癌居女性恶性肿瘤首位,远端转移是其主要死亡的原因。乳腺癌亚型多,发病快,特别是三阴乳腺癌(Triple-negative breast cancers,TNBC)缺乏雌孕激素受体的表达,没有人表皮生长因子2受体(HER2)的过表达,不能从内分泌和靶向治疗中受益,且具高度侵袭性,有着最差的总生存率和无病生存期。目前美国食品药品监督管理局(FDA)尚未批准任何专门针对TNBC的靶向药物,传统化疗是TNBC患者最主要的治疗手段,一旦发生转移及耐药,患者预后极差。因此,针对TNBC发生发展的特点,寻找关键靶点及相应的调控信号,对TNBC临床诊断和治疗具有很高的应用价值和重要意义。雌激素介导的生物学效应在乳腺癌的发生发展中起着至关重要的作用。近期研究表明,雌激素不仅通过经典雌激素受体(estrogen receptor α/[β,ERα/β)的基因组效应行使功能,而且可以通过非经典雌激素信号(如雌激素相关受体α/β/Y(ERRα/β/γ),G蛋白偶联雌激素受体(GPER))直接识别雌激素反应元件(ERE)、与雌激素结合并活化下游信号等机制发挥作用。雌激素相关受体(ERRs)是第一类被发现的核孤儿受体。高表达于胚胎、生殖等高耗能或新陈代谢快的组织中。其具有与雌激素受体高度相似的DNA结合域,并能够通过FN信号通路调控三阴乳腺癌中的侵袭转移。在缺乏ERα/β表达的TNBC中,非经典雌激素信号可能发挥了重要作用。信号传导和转录活化因子(Signal transducer and activator of transcription,STATS)是一类由细胞因子、生长因子等多肽类配体激活的转录因子家族,具有极其重要的生物学功能。STAT3是STATS家族中最重要的成员之一,表达强度与肿瘤生长、侵袭转移等密切相关。目前STAT3已被公认为癌基因,成为肿瘤治疗和抗癌药物发现的重要靶点。在乳腺癌的侵袭转移过程中,上皮间质转化是其关键的步骤。这一过程在癌症中表现为,在突变或外界刺激下,紧密排列的上皮表型细胞转化为分散的间质表型细胞,从原发灶脱离,进入血管内皮并前往继发灶的现象。上皮间质转化发生的分子标志为E-钙粘蛋白减少,N-钙粘蛋白及波形蛋白增加等。基于组织芯片,利用免疫组化的方法,我们发现,在三阴乳腺癌中,STAT3的表达量显著高于非三阴乳腺癌及正常组织。同时,我们还发现雌激素相关受体(ERRs)也相应升高,进一步我们采用了 Westem Blot及实时定量PCR方法发现在三阴性乳腺癌细胞系中STAT3、p-STAT3及ERR-αα表达量存在正相关趋势;基于以上结果,我们推测STAT3与ERRs可能具有关联性。围绕该假设我们展开了验证工作。通过建立高表达及干扰STAT3细胞系,发现ERR-α受STAT3正向调控。在高表达STAT3的细胞系中,ERR-α的mRNA及蛋白表达量随之增高,反之亦然。为了揭示具体何种通路导致STAT3影响ERR-α的表达量变化,我们采用了 JAK2-STAT3信号通路抑制剂AG490及刺激剂IL-6对信号通路进行了处理。采用Western Blot、实时定量PCR及免疫荧光染色方法,检测了处理后相关蛋白及mRNA的表达量变化,其阳性结果验证了该通路对STAT3调控ERR-α的影响。在确定了其正相关性及调控关系存在后,我们构建了 ERR-α启动子区域稳定转染的荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因检测实验,验证了 STAT3能够通过激活ERR-α的启动子区域来调控其表达。进一步地,我们通过染色质免疫共沉淀实验,发现磷酸化的STAT3能够在细胞核中结合ERR-α的启动子区域,从而激活ERR-α的表达。为了确定该信号通路在三阴性乳腺癌中于侵袭转移之间的关系,我们采用构建的稳转高表达STAT3细胞株及干扰STAT3细胞株进行了侵袭转移相关实验。Transwell实验及伤痕愈合实验的结果表明,STAT3-ERR-α信号通路能够提高三阴乳腺癌的侵袭转移能力,而对这条通路的抑制亦能降低三阴乳腺癌的侵袭转移能力。同时为了确定其是否通过上皮间质转化过程影响三阴乳腺癌的侵袭转移能力,我们通过Western Blot、实时定量PCR及免疫荧光染色方法,检测了上皮间质转化关键基因及蛋白的表达情况。结果表明STAT3-ERR-α信号通路能够促进上皮间质转化的进行,抑制该通路亦可以降低三阴乳腺癌上皮间质转化的能力。综上所述,我们得到如下结论:在三阴性乳腺癌中,p-STAT3可以通过JAK2-STAT3-ERR-α通路结合于ERR-α启动子区域并调控ERR-α的表达,该通路亦能促进三阴性乳腺癌的上皮间质转化及提高其侵袭转移能力。本研究揭示了 STAT3调控ERR-α及其影响三阴性乳腺癌EMT和侵袭转移的机制,发现了三阴性乳腺癌中存在STAT3-ERR-0α信号通路。旨在为STAT3玉-ERR-α信号通路作为三阴性乳腺癌临床靶点提供实验基础及数据。同时为ERR-α抑制剂的筛选及应用提供了思路。