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2002年11月在我国广东省流行的“严重急性呼吸综合征”(SevereAcuteRespiratorySyndrome,SARS),是一种危害人民生命健康的急性传染病,仅半年多的时间里,就遍布于全球29个国家和地区,对全球经济发展造成严重的影响。SARS的病原体是一种新的冠状病毒,世界卫生组织2003年4月16日正式将其病原体命名为SARS冠状病毒(SARS-CoV)。
SARS-CoV是有包膜的正链RNA病毒,主要的蛋白质有RNA复制酶(复制酶Ia,Ib),核衣壳蛋白N(nucleocapsid),棘突蛋白S(spikeprotein),膜蛋白M(membraneprotein),小分子膜蛋白E(smallmembraneprotein)。该病毒至少有14个可能的开放阅读框架(ORFs)。S蛋白是SARS-冠状病毒主要的结构蛋白,也是结构蛋白区编码的最大的蛋白质,构成了病毒重要的抗原成分。N蛋白与病毒RNA紧密结合,缠绕在病毒基因组的表面形成螺旋状核壳体,在RNA的转录和病毒的形态发生过程中起着重要的作用。
本文通过对医务人员及SARS患者等进行跟踪调查,掌握了SARS在天津市流行的一般情况,发病初期主要在医院内爆发流行,其中医务人员感染者多,比例高,死亡天数与年龄成反变关系等,并对SARS流行特点进行了初步的分析。同时应用生物信息学技术,界定冠状病毒SARS-CoVS蛋白和N蛋白的抗原决定区域,通过PCR扩增相应片段,克隆至原核表达载体pET-H,得到七个重组质粒pET-HS1、pET-HS3、pET-HS4、pET-Hs5、pET-HNl、pET-HN3及pET-HN4,经序列测定读码框正确,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,pET-HS1、pET-HS3、pET-Hs4、pET-HS5、pET-HN1及pET-HN4获得高效表达。表达产物经紫外薄层扫描显示目的蛋白占菌体细胞总蛋白量的20-30%。经Westernblot检测,表达蛋白与恢复期SARS病人血清呈高反应原性。纯化相应蛋白免疫小鼠,所获抗血清效价达1:3×103。与SARS诊断试剂反应呈阳性,这些工作将为进一步研究SARS的流行规律,S蛋白、N蛋白的定位、功能及SARS的预防和诊断提供帮助。