电磁脉冲辐射对小鼠睾丸BTB的影响及其分子机制

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研究目的:  随着科技的发展,电磁技术已在电视、广播、导航、环境监测、通讯、工农业生产、家用电器乃至国防等领域广泛应用。电磁技术在给人类带来方便的同时,也造成了环境污染,对人类健康产生了极大的威胁。电磁脉冲(electromagneticpulse,EMP)属于电磁辐射的一种,我们前期研究已证实,一定强度的EMP能够对机体造成损伤,特别是生殖系统是EMP最敏感的靶器官之一。本研究拟在前期研究的基础上,探讨EMP辐射对小鼠睾丸血-睾屏障(blood-testis-barrier,BTB)结构和功能的影响,并探讨BTB紧密连接(tightjunction,TJ)蛋白Oclludin和BTB调节蛋白TGFβ家族成员表达水平和空间定位的变化。  方法:  采用400kV/mEMP全身辐射成年雄性小鼠,观测辐射后1d、7d、14d、21d和28d小鼠体重、睾丸重量、血清T水平变化;HE染色、硝酸镧示踪电镜、EB示踪观察BTB结构和通透性变化以及生精细胞损伤情况;Real-timePCR、Western-blotting和免疫荧光观测BTBTJ蛋白Occludin表达水平的变化;免疫组织化学观察TGFβ家族成员TGF-β1、TGF-β3和TGFβ-RI表达水平的改变。  结果:  1.400kV/mEMP辐射后14d、21d和28d,辐射组小鼠体重与对照组相比明显降低;并且睾丸体重比在辐射后7d、14d和21d,辐射组与对照组相比也明显降低。  2.400kV/mEMP辐射后1d、7d和14d,辐射组血清T水平明显上调。  3.HE染色、硝酸镧示踪电镜、EB示踪观察均证实400kV/mEMP辐射后BTB的结构遭到破坏,BTB通透性明显增强,伴随大量生精细胞的脱落、坏死和凋亡。  4.Real-timePCR、Western-blotting和免疫荧光观测发现BTBTJ蛋白Occludin表达在400kV/mEMP辐射后与对照组相比明显下调,至辐射后28d基本恢复。  5.免疫组织化学结果显示TGF-β1在正常对照组主要表达于生精周期第Ⅵ-Ⅷ期圆形精子细胞、长型精子细胞和精子细胞,400kV/mEMP辐射后,其表达水平明显上调;TGF-β3在正常对照组小鼠睾丸主要表达于Leydig细胞胞质,400kV/mEMP辐射后TGF-β3的表达呈现先升高后降低的变化;TGFβ-RI在正常对照组小鼠睾丸主要表达于晚期精母细胞(第Ⅷ期)至早期长型精子细胞(第X期),400kV/mEMP辐射后其表达显著上调。  结论:  1.400kV/mEMP辐射能够降低小鼠的体重和睾丸重量。  2.400kV/mEMP辐射升高小鼠血清T水平。  3.400kV/mEMP辐射能够损伤BTB的结构,增加BTB的通透性,伴随生精细胞的脱落、坏死与凋亡。  4.400kV/mEMP辐射能够下调BTBTJ蛋白Occludin的表达。  5.400kV/mEMP辐射能够改变TGFβ家族成员TGF-β1、TGF-β3和TGFβ-RI的定位和表达水平。
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