目的：用基因工程技术克隆和表达H.pylori 的hpaA基因，以纯化的重组蛋白为抗原，建立检测血清HpaA抗体的间接ELISA法，探讨以重组蛋白作为抗原在诊断H.pylori感染中的价值。方法：用PCR方法从H.pylori DNA中扩增hpaA基因片段。插入原核表达载体pQE30，转化受体菌DH5a，克隆及序列分析后在大肠杆菌中进行高效表达，表达产物经纯化和Western blot鉴定后，作为抗原,建立检测血清H.pylori HpaA抗体的间接ELISA法，与科研诊断标准比较评价其应用的可行性。结果： 1.重组表达质粒pQE30-hpaA构建成功,序列分析所得序列完整，插入的基因片段全长783bp，与基因文库中的hpaA基因同源性达97.3%；2. SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为30 000，表达量占全菌总量的31.67%；3. Western blot显示该蛋白可被病人血清所识别；4.SDS-PAGE分析表达形式，蛋白主要存在于细菌裂解液上清中，部分存在于包涵体中,经Ni2+-NTA树脂对上清进行纯化后，可得到纯度90%以上的蛋白质；5.重组蛋白免疫兔后的免疫血清双扩<WP=8>效价为1:16；6. 通过对临床标本的检测结果显示HpaA抗体检测的敏感性和特异性分别为100.0%和90.1%。结论：H.pylori hpaA基因片段克隆表达成功，获得高纯度重组蛋白并具有良好的免疫原性和抗原性，为研制疫苗和制备诊断H.pylori感染试剂盒提供了可靠材料。以重组蛋白为抗原初步建立检测血清HpaA抗体的间接ELISA法，敏感性、特异性高，为制备商品化的试剂盒奠定了基础。