大鼠精子发生相关蛋白的研究

来源 :中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a77115280
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  本实验中,用牛血清白蛋白梯度沉降(STAPUT)法分离出大鼠睾丸处于减数分裂前、中、后期的3种生精细胞,即A型精原细胞、粗线期精母细胞和圆形精子细胞。A型精原细胞的总蛋白代表减数分裂前期所表达的蛋白,粗线期精母细胞的总蛋白代表减数分裂中期所表达的蛋白,圆形精子细胞的总蛋白代表减数分裂后期所表达的蛋白。   分别提取这3种细胞的总蛋白,进行双向电泳。对A型精原细胞、粗线期精母细胞、圆形精子细胞总蛋白表达谱的差别进行分析,寻找与精子减数分裂有关的蛋白质。本实验中,圆形精子细胞双向电泳凝胶中共检到341个蛋白质点,A型精原细胞凝胶中有424个蛋白质点,粗线期精母细胞凝胶中有551个蛋白质点,3种细胞蛋白表达具有较大差异。   挑选了4个表达量大,差异明显,肉眼即能看出差别的蛋白质点做飞行质谱分析,了解差异蛋白身份。对质谱检测所得肽质量指纹图数据,检索互联网上的蛋白质数据库,发现4个蛋白质点分别是:热休克蛋白70-2(Hsp70-2)、磷脂酰乙醇胺结合蛋白(RKIP)、β-肌动蛋白(β-actin)、睾丸酯结合蛋白(Tlbp)。   研究表明,Hsp70-2、RKIP、β-肌动蛋白、睾丸酯结合蛋白4种蛋白质,在精子发生不同阶段特异表达,分别在精子发生过程中起到不同的重要作用。而这4种蛋白在精子发生中的具体功能及其分子机制,还有待进一步深入研究。   
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