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目的:利用免疫共沉淀联合质谱分析方法,在自然临产前后人子宫平滑肌组织内筛选与NF-κB相互作用蛋白质。
方法:12例健康孕妇(分为未临产组、自然临产组,每组6例),剖宫产术中活检子宫下段平滑肌组织,分别提取临产前后的人足月妊娠子宫下段平滑肌总蛋白质,应用western blotting确定NF-κB p65在这两组中的表达,免疫共沉淀技术分别富集这两组的NF-κBp65结合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离,从胶中切取NF-κBp65结合蛋白条带,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱(LC-E S I-MS/MS)分析。
结果:Western bloting验证了NF-κB p65在临产前后人子宫下段平滑肌中的表达,通过搜索数据库在人子宫平滑肌中鉴定出12个NF-κBp65结合蛋白。所鉴定的12个蛋白根据其功能,有以下几类:细胞骨架蛋白、信号传导相关蛋白质、急性相反应蛋白类及代谢和能量相关酶类。
结论:采用免疫共沉淀藕联肽质量指纹质谱技术,在自然临产前后人子宫平滑肌组织中筛选出12个与NF-κBp65相互作用的蛋白,分别是 Desmin, EH domain-containing protein2, Heat shock70 kDaprotein, Annexin A6, Alpha-actinin-1, Filamin-A, TRIM27 Isoform Beta ofZinc finger protein RFP, Vimentin, ATP synthase subunit alpha,mitochondrial, Isoform1 of Alpha-1-antitrypsin, Tubulin alpha-1A chain,Tubulin alpha-1C chain。其中,足月临产组与未临产组有9个相同的蛋白,足月临产组比未临产组多3个差异蛋白:Alpha-actinin-1,Filamin-A,TRIM27 Isoform Beta of Zinc finger protein RFP。这些蛋白可能在NF-κ B参与的分娩发动中起作用。