青蒿琥酯对实验性自身免疫性脑脊髓炎防治作用的研究

来源 :泸州医学院 西南医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cherish_zww
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目的:观察青蒿琥酯(Ast)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的防治作用并探讨其作用机制。方法:将50只Wistar雌性大鼠随机分成5组:正常对照组、EAE对照组及Ast大剂量、中剂量、小剂量组。用新鲜豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)与含卡介苗(BCG)的完全福氏佐剂(CFA)建立EAE模型。自造模当日起连续10天,Ast大、中、小剂量组分别给予Ast20mg/(kg.d)、10mg/(kg.d)、5mg/(kg.d)进行干预。于EAE大鼠发病高峰期(大鼠神经功能障碍评分连续三天无增加或大鼠处于濒死状态、对外界刺激无反应或死亡)终止实验,已经注入免疫抗原进行EAE造模处理而未发病大鼠及正常对照组大鼠分别均于观察1个月后处死。对大鼠进行神经功能障碍评分,将中枢神经系统(CNS)切片于苏木素-伊红(HE)染色后行病理观察并根据Okuda等的标准进行评分,予免疫组织化学检测脑组织中前列腺素E2(PGE2)及酪氨酸蛋白激酶A4(EphA4)、多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)的表达情况,用ImagePro Plus软件对PGE2、EphA4、PARP-1的表达进行平均光密度值(OD值)测定,予放射免疫法和双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定脑组织中TNF-及IL-17含量,并采用放射免疫法测定血清中IL-2、IL-4含量,使用spss17.0软件对所获得的数据进行统计学分析。结果:(1)临床情况:①正常对照组大鼠未发病。与EAE对照组相比,Ast各剂量组EAE发病率均下降(P<0.05),但Ast大、中剂量组间发病率差异无统计学意义(P>0.05)。②与EAE对照组相比,Ast各剂量组EAE发病潜伏期均延长(P<0.05),以大剂量组潜伏期延长最明显。③与EAE对照组相比,Ast各剂量组EAE疾病进展期均缩短,且随Ast剂量增加,进展期越短,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。④与EAE对照组相比,Ast各剂量组神经功能障碍评分均降低,以Ast大剂量组最为明显,且各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色病理学观察情况:正常对照组大鼠脑组织内未见炎性细胞浸润。EAE对照组及Ast各剂量组脑组织小血管周围均可见不同程度炎性细胞浸润,典型者大量淋巴细胞及单核细胞聚集于血管周围呈袖套样改变。按Okuda等的标准进行评分,与EAE对照组相比,Ast各剂量组评分均有下降(P<0.05),且随Ast剂量增加EAE大鼠脑组织病理学评分依次降低,各剂量组间差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)EAE对照组及Ast各剂量组免疫组织化学结果:①与正常对照组相比,EAE对照组及Ast各剂量组PGE2含量均明显升高(P<0.05)。与EAE对照组相比,Ast各剂量组PGE2含量均减少(P<0.05),且随Ast剂量的增加PGE2含量依次下降,各剂量组间差异具有统计学意义(P<0.05)。②正常对照组未见EphA4的表达,EAE对照组与Ast各剂量组均可见EphA4表达,尤以EAE对照组明显。与EAE对照组相比,Ast各剂量组EphA4表达均减少,且随Ast剂量增加EphA4表达呈下降趋势,各剂量组间差异有统计学意义(P<0.05)。③与正常对照组相比,EAE对照组PARP-1表达减少,而Ast各剂量组PARP-1表达上调(P<0.05)。与EAE对照组相比,Ast各剂量组PARP-1表达均增多(P<0.05),以大剂量组增多最明显,且Ast各剂量组间差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)EAE对照组及Ast各剂量组脑组织内TNF-及IL-17含量变化:①EAE对照组及Ast各剂量组脑组织内TNF-含量较正常对照组均增加,但Ast大剂量组与正常对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。与EAE对照组相比,Ast各剂量组TNF-含量均减少,差异有统计学意义(P<0.05),且随Ast剂量增加,大鼠脑组织TNF-含量减少越明显(P<0.05)。②与正常对照组相比,EAE对照组和Ast各剂量组IL-17含量均明显升高(P<0.05)。与EAE对照组相比,Ast各剂量组IL-17含量均下降,且随Ast剂量的增加IL-17含量下降越明显,各组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。(5)EAE对照组及Ast各剂量组血清中IL-2、IL-4含量变化:①与正常对照组相比,EAE对照组及Ast各剂量组血清中IL-2含量均升高(P<0.05)。与EAE对照组比较,Ast各剂量组IL-2含量均减低(P<0.05)。随Ast剂量的增加Ast各剂量组IL-2含量依次下降,但大、中剂量组间差异无统计学意义(P>0.05)。②Ast各剂量组IL-4含量较正常对照组升高,而EAE对照组IL-4含量较正常对照组下降,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与EAE对照组比较,Ast各剂量组IL-4含量均升高(P<0.05),且随Ast剂量的增加Ast各剂量组IL-4含量依次上升,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。(6)相关性分析:①EAE对照组及Ast各剂量组发病潜伏期与大鼠脑组织内PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈负相关(P<0.01或P<0.05),与脑组织内PARP-1含量和血清中IL-4含量呈正相关(P<0.01或P<0.05)。②EAE对照组及Ast各剂量组发病进展期与大鼠脑组织内PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈正相关(P<0.01或P<0.05),与脑组织内PARP-1含量和血清中IL-4含量呈负相关(P<0.01或P<0.05)。③EAE对照组及Ast各剂量组发病高峰期大鼠神经功能障碍评分与大鼠脑组织内PGE2、EphA4、TNF-a和IL-17含量及血清中IL-2含量呈正相关(P<0.01或P<0.05),与脑组织内PARP-1含量和血清中IL-4含量呈负相关(P<0.01或P<0.05)。结论:1.PGE2及EphA4在EAE大鼠发病过程中含量均升高,PARP-1含量下降,PGE2、EphA4和PARP-1含量均与发病潜伏期、进展期以及发病高峰期大鼠神经功能障碍评分密切相关,提示PGE2、EphA4及PARP-1在EAE疾病发生发展过程中发挥着重要作用。2.TNF-a、IL-17及IL-2在EAE大鼠发病过程中含量均上升,IL-4含量下降,TNF-a、IL-17、IL-2和IL-4含量均与发病潜伏期、进展期及发病高峰期大鼠神经功能障碍评分密切相关,提示TNF-a、IL-17、IL-2及IL-4在EAE疾病的病情衍变过程中具有重要作用。3.不同剂量组Ast均可不同程度降低EAE大鼠的发病率,延长发病潜伏期,缩短疾病进展期,降低疾病高峰期神经功能障碍评分,改善EAE大鼠脑组织病理学改变,提示Ast对EAE大鼠发病可能具有防治作用,且防治作用与剂量相关。4.Ast对EAE大鼠发病具有防治作用所涉及的机制可能包括抑制PGE2和EphA4的产生,减少TNF-、IL-17和IL-2的分泌以及上调PARP-1的表达,增加IL-4的合成。
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