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目的:采用一测多评方法,在爵床多个有效成分中,选定一个性质稳定且对照品较容易获得的成分作为内参物,取各个指标成分的对照品与内参物的对照品,建立各成分相对于内参物的相对校正因子,建立仅用一个对照品对多个成分进行同时含量测定的方法。在此基础上,以多个成分为指标,对爵床药材在储藏过程中有效成分含量的变化进行研究;并对爵床中木脂素的提取纯化工艺进行系统研究,为下一步的新药研发提供技术支持。 (2)方法:(1)采用HPLC- DAD,求得各被测成分相对于内参物金不换萘酚甲醚的计算因子,从而实现以金不换萘酚甲醚为对照,同时测定样品中6-羟基爵床脂素A、6-羟基爵床脂素B、爵床脂素B、金不换萘酚甲醚、台湾脂素E甲醚、6-羟基爵床脂素C和新爵床辛A7种成分的含量。建立基于相对校正因子同时测定以上7种木脂素含量的方法。(2)采用不同包装材料对爵床药材进行储藏实验,结合已建立的相对校正因子,考察多个木脂素成分的含量变化情况。以传统不包装堆放为对照,考察分别以编织袋、塑料袋、纸箱、麻袋、布袋包装的同一批爵床药材中木脂素类成分在6个月内的含量变化情况。(3)以爵床为研究对象,对其木脂素成分的提取工艺依次进行单因素考察,正交试验设计,对提取因素和水平进行优化。另外,对大孔树脂柱上柱条件逐一进行考察,优化大孔树脂柱对爵床中木脂素成分的洗脱纯化效果。 结果:(1)建立了基于相对校正因子同时测定爵床中7种木脂素含量的方法。以金不换萘酚甲醚为内参物,其余6个成分对内参物的相对校正因子依次为1.31、0.91、0.89、1.40、0.87、1.10。不同仪器、不同色谱柱测得相对校正因子间的RSD(Relative Standard Deviation)小于2.5%。其余6个成分对内参物的保留时间的比值即相对保留值依次为0.663、0.737、0.806、0.906、1.117、1.205。不同仪器、不同色谱柱测定相对保留值间的RSD小于2%。对10批不同产地的爵床药材分别采用外标一点法(测定法)和相对校正因子计算法(计算法)进行测定,结果利用t检验进行比较,结果表明以相对校正因子测得的结果与常规的含量测定方法测得的结果之间无显著性差异(P>0.05)。(2)考察了6种储藏方式的爵床药材在储藏期内木脂素成分含量变化情况,实验结果采用统计学t检验对其进行具体分析。实验比较了储藏过程中各个化合物在不同包装材料与选定对照之间的含量差异。另外,比较了各个化合物在储藏6个月后与储藏实验前的含量变化差异。根据实验和统计结果可知,储藏6个月后,各成分的含量与实验前具有显著性差异(P<0.05),含量明显降低。不同包装材料与选定对照之间也存在差异,特别是用塑料袋和纸箱包装的样品中,所测目标成分与选定对照样品中的含量均有显著性差异(P<0.05)。(3)采用正交实验设计对爵床中木脂素提取工艺进行优化,最终确定了最佳提取工艺,优化后提取工艺为:用10倍量70%乙醇提取两次,每次提取1h。优化后工艺对木脂素提出量高,达到预期优化效果。另外,对大孔树脂分离纯化工艺进行了考察,结果使用ADS-7型大孔树脂的纯化效果较好,所以选择ADS-7大孔树脂,洗脱溶剂为95%乙醇,溶剂用量为10倍体积(BV)。 结论:本文建立了利用相对校正因子同时测定爵床药材中7种木脂素类成分的方法,方法准确、可靠,操作简便,实现中药多指标含量同时测定,可以降低对照品的使用数量,同时也将大大降低分析检测的成本和效率。另外,对爵床药材不同储藏方式对其主要成分含量变化进行了研究,为药材优选、储藏及安全有效使用提供了理论依据。同时对爵床药材提取纯化工艺进行研究,为下一步新药研发奠定了基础。