阿西替尼及其清洁验证中残留物的HPLC分析方法研究

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阿西替尼(Axitinib,简称AXI),是一种生物靶向治疗肿瘤的新药,它也是一种小分子蛋白激酶抑制剂。它的分析方法文献报道的很少,而且有关它在生产设备清洁验证中残留物的分析方法未见文献报道,因此研究阿西替尼及其清洁验证中残留物的分析方法,具有重要的应用价值。本论文在查阅国内外文献的基础上,采用高效液相色谱(HPLC)外标法,对阿西替尼及其清洁验证中残留物的分析方法进行了研究,具体内容如下:1)对药品生产设备清洁验证及阿西替尼的分析方法进行了介绍。2)采用高效液相色谱外标法,对阿西替尼的分析方法进行了研究,并对各项色谱条件进行了研究,结果如下:采用的分析仪器及设备为:高效液相色谱分析仪型号为Agilent 1260,紫外检测器型号为DAD,液相色谱柱型号为Agilent Eclipse XDB C18(250 mm×4.6mm×5μm)。较优的色谱条件为:外标物为阿西替尼的标准品,检测波长为220nm,进样量为5μL,柱温为45℃,流速为1.2 mL/min,流动相为磷酸二氢铵缓冲液(pH4.2,简称A)和甲醇(简称B),采用梯度洗脱(0分钟,A:B=50:50;20分钟,A:B=35:65,25分钟,A:B=10:90,25.1~30分钟,A:B=50:50)。测得AXI的浓度范围在198.5587~297.8381μg/mL时,相关系数为R~2=0.9992,线性良好。另外对该方法在溶液稳定性、准确度、精密度(重复性和重现性)、专属性和耐用性等方面也进行了研究,均能达到要求。3)采用高效液相色谱外标法,对清洁验证中残留物阿西替尼及其中间体(AXI30)的分析方法进行了研究,并对各项色谱条件进行了探索,结果如下:阿西替尼中间体(AXI30)残留物分析方法中采用的分析仪器及设备为:高效液相色谱分析仪及检测器同上,液相色谱柱型号为Agilent Zorbax EclipsePlus-C18(100 mm×4.6 mm×3.5μm)。较优的分析条件为:外标物为AXI30的标准品,检测波长为220 nm,进样量为5μL,柱温为45℃,流速为1.2 mL/min,流动相为磷酸二氢铵缓冲液(pH4.2,简称A)和甲醇(简称B),采用梯度洗脱(0分钟,A:B=50:50;10分钟,A:B=43:57;15分钟,A:B=10:90;15.1~20分钟,A:B=50:50)。测得AXI30定量限为1.0068μg/mL,当浓度范围在1.0068~10.0675μg/mL时,相关系数为R~2=0.9999,线性良好。另外对该方法在准确度、精密度和专属性方面进行了研究,均能达到要求。阿西替尼残留物分析方法中采用的分析仪器及设备为:高效液相色谱分析仪及检测器同上,液相色谱柱型号为Agilent Zorbax Eclipse Plus-C18(100mm×4.6mm×3.5μm)。较优的分析条件为:外标物为阿西替尼的标准品,检测波长为220nm,进样量为40μL,柱温为45℃,流速为1.2 mL/min,流动相为磷酸二氢铵缓冲液(pH4.2,简称A)和甲醇(简称B),采用梯度洗脱(0分钟,A:B=50:50;10分钟,A:B=43:57;15分钟,A:B=10:90;15.1~20分钟,A:B=50:50)。测得阿西替尼的定量限为0.0498μg/mL,当浓度范围在0.0498~0.2491μg/mL时,相关系数为R~2=0.9998,线性良好。另外对该方法在准确度、精密度和专属性方面进行了研究,均能达到要求。本论文提供的阿西替尼及其清洁验证中残留物的高效液相色谱分析方法,未见文献报道,而且能准确检测并定量出阿西替尼及其中间体的残留量,在药品生产和设备清洁验证中具有较大的应用价值。
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