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目的：Wilson病(Wilson’s Disease, WD),又称肝豆状核变性(hepatolenticular degeneration,HLD),是一种与铜代谢障碍有关的神经系统疾病,从本病被报道以来的近一个世纪的时间里,对本病虽有各种各样的研究及发现,但截止到目前为止,对WD的研究尚无法清楚解释其临床表现各异的症状原因和病理。本研究目的如下(1)基于NMR的代谢组学的研究方法,对WD造模成型前大鼠、WD模型大鼠及其中西药干预疗效比较进行探索。(2)以NMR和生物信息学等现代技术,通过对血液代谢组的分析,研究WD造模成型前大鼠、WD模型大鼠及其中西药干预后的内源性代谢物的变化,获得相关代谢物指纹图谱探讨血液中有关小分子代谢物变化的原因。(3)确定与WD发病前、发病后和中西药治疗WD机理密切相关的小分子标志化合物；为WD发病前和发病后,及其中西药疗效比较的系统研究提供科学依据。也试图以此为切入点,运用代谢组学的技术与方法,探索出一种研究WD的新方法、新途径。方法：选用健康成年Wistar雄性大鼠共66只,体重180±20g, SPF级。以铜负荷法造模WD大鼠模型,随机分为6组：15天模型组(n=11)、15天健康对照组(n=11)、WD模型组(n=11)、健康对照组(n=11)、中药干预组(n=11)和青霉胺干预组(n=11)。以检测尿铜、肝铜为评判造模依据。在Varian Unityinova 500MHz超导傅里叶变化核磁共振波谱仪上编辑NOEPR-CPMG (NOEPR, Nuclear Overhauser Effect spectroscopy with PResaturation;CPMG,Carr-Purcell-Meiboom-Gill sequence)脉冲序列进行数据采样,其中预饱和模块用于抑制水峰信号。饱和时间为2S,温度300K,谱宽5kHz,信号累加256次。自由感应衰减(FID)信号经过傅里叶变换得到一维NMR谱图,采用MestRe-C 2.3软件及自编软件对谱图进行手动调相、基线校正和谱峰对齐,对0.2-4.6区域按Δδ=0.02等间隔分段积分。将积分数据归一化后构成数据矩阵,并利用PCA方法对数据矩阵进行统计分析。结果：1、和15天健康对照组大鼠相比,15天模型组大鼠血清内有以下小分子代谢物的变化：脂质(-CH2-)、乳酸(lactate)、脯氨酸(proline)、丙酮(acetone)含量有所降低,谷氨酸盐(glutamine)、葡萄糖(glucose)、胆碱磷酸(phosphorylcholine)的含量有所升高。2、和健康对照组大鼠相比,模型组大鼠血清甜菜碱与氧化三甲胺(TAMO+betaine)、低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)、葡萄糖(glucose)含量明显降低,胆碱(choline)、胆碱磷酸(phosphorylcholine)的含量降低,乳酸(lactate)、谷氨酰胺(glutamine)、糖蛋白(glycoprotein)的含量明显升高,肌氨酸+肌氨酸酐(creatinine),精氨酸(arginine)有所升高。3、模型组大鼠和15天模型组大鼠相比,其血清代谢物差异存主要在于乳酸(lactate)、葡萄糖(glucose)、精氨酸(arginine)、丙酮(acetone)、酪氨酸(tyrosine)的浓度变化上。4、相对于模型组大鼠,中药干预组大鼠血清糖蛋白(glycoprotein)、3-羟基丁酸(3-hydroxybutyrate)、脂质(Lipid, mainly VLDL/LDL)、葡萄糖(glucose)、胆碱(choline)、磷酸胆碱(phosphorylcholine)明显升高,亮氨酸(leucine)、异亮氨酸(isoleucine)有所升高。乳酸(lactate)明显下降,谷氨酰胺(glutamine)、肌氨酸+肌氨酸酐(Creatine+ creatinine)、精氨酸(arginine)有所下降。5、相对于模型组,西药干预组大鼠乳酸(lactate)、糖蛋白(glycoprotein)、谷氨酰胺(glutamine)代谢物含量明显下降,肌氨酸和肌氨酸酐(Creatine+ creatinine)有所下降,葡萄糖(glucose)含量明显升高,甜菜碱(TMAO+ betaine)、脂质(Lipid)、胆碱(choline)、磷酸胆碱(phosphorylcholine)有所升高。6、比较西药治疗组和中药治疗组,中药组3-羟基丁酸(3-hydroxybutyrate)、亮氨酸(leucine)、异亮氨酸(isoleucine)、缬氨酸(valine)浓度有所下降。结论及创新点：1、本实验首次将基于核磁共振的代谢组学方法应用于Wilson病模型大鼠及其中西药干预疗效比较的研究,属于本学科动态前沿,是研究WD方法学的创新。2、通过对15天模型组和15天健康对照组、模型组和健康对照组的代谢物对比分析,所得出的小分子代谢物能够为进一步为今后对WD发病前、发病后的研究提供一定的参考。其中,谷氨酰胺的结论为研究神经退行性病变中所存在的问题提供了数据参考。通过对所得代谢物的分析,呼应了中医对本病的认识,为对本病的中医现代化研究体供了一条思路。3、通过对中、西药干预组的研究,为丰富青霉胺对铜的解毒机理提供了一定数据参考。中药治疗组中,一些小分子代谢物的发现初步印证了中药治疗Wilson病的同时具有滋补肝肾,补精填髓功效,为以后深入的从现代化系统医学角度对中药干预Wilson病的研究奠定了基础。4、通过分析中、西药对治疗本病的差异,从而在整体的、系统的代谢层面探讨了中西药干预本病的异同,并发现中药干预本病的代谢网络比较复杂,呈多靶点,为以后对本病治疗的深入研究提供了一种可行的研究方法。5、通过实验证明,基于NMR的代谢组学研究方法可以较好地用于WD发病前和发病后与正常对照的区分,及中、西药对WD疗效的对比分析,从而获得具有特征性的代谢物,是寻找WD及其中、西药干预后的小分子特征标志物的有效方法,在未来WD的诊断、病理生理研究以及药物治疗等方面具有广阔的应用前景。