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目的:检测Wip1及Wip1-p38MAPK—p53信号通路相关蛋白在肺癌细胞中的表达情况,探讨Wip1在肺癌发生中的作用机制,寻求肺癌靶向治疗的新靶点。
方法:⑴人工培养非小细胞肺癌(NSCLC)细胞(肺腺癌细胞A549、肺鳞癌细胞NCI-1299、大细胞肺癌细胞NCI—H460)和正常支气管上皮细胞HBE。⑵抽提各种细胞总RNA进行实时荧光定量PCR反应,经PCR扩增目的片段及18s rRNA对照片段,以Wip1和18s rRNA扩增片段的图像强度比值表示Wip1mRNA的表达水平,分析Wip1mRNA在肺癌细胞和正常支气管上皮细胞的表达情况以及在不同肺癌细胞中表达的差异。⑶抽提细胞蛋白,以western blot检测Wip1蛋白的表达,以Wip1蛋白和GAPDH蛋白图像的灰度比值表示Wip1蛋白的含量水平,并分析Wip1蛋白在肺癌细胞和正常支气管上皮细胞的表达情况以及在不同肺癌细胞中表达的差异。⑷抽提细胞蛋白,以western blot检测p53、p—p53、p38MAPK和p—p38MAPK蛋白的表达水平,以其蛋白和GAPDH蛋白图像的灰度比值表示其蛋白的含量水平,并分析Wip1-p38MAPK—p53通路的相关蛋白在肺癌细胞和正常支气管上皮细胞的表达情况。
结果:①A549、NCI-1299、H460细胞中Wip1mRNA的表达均高于HBE,差异有统计学意义(P<0.05);各种肺癌细胞间Wip1mRNA的表达无明显差异(P>0.05)。②A549、NCI-1299、H460细胞中Wip1蛋白的表达均高于HBE,差异有统计学意义(P<0.05);各种肺癌细胞间Wip1蛋白的表达无明显差异(P>0.05)。③p—p53和p—p38MAPK蛋白在肺癌细胞中的表达低于HBE,差异有统计学意义(P<0.05),肺癌细胞中:Wip1↑、p—p38MAPK↓、p—p53↓,存在着Wip1-p38MAPK—p53信号通路的失衡。
结论:⑴Wip1在肺癌细胞(A549、NCI-1299、H460)中高表达,提示Wip1可能与肺癌的发生有关。⑵肺癌细胞中存在Wip1↑、p—p38MAPK↓、p—p53↓,Wip1-p38MAPK—p53信号通路的失衡可能是Wip1在肺癌中的致癌机制之一。